专利名称：一种牛α-乳白蛋白的定量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种乳或乳制品中热变性和非变性牛α -乳白蛋白的定量检测方法。
背景技术：
牛α-乳白蛋白(Bovine a-Lactalbumin)是由123个氨基酸残基组成的结构紧密的单体球蛋白，含有4个二硫键，结构相对稳定，平均分子量为14178道尔顿。牛α -乳白蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，它与人乳中的α-乳白蛋白具有76%的氨基酸组成相似度。其主要生理作用在于与金属离子的结合能力，还含有丰富的色氨酸，有助于提高血液中复合胺的释放，促进神经发育，具有很好的营养价值。市场上出现了大量添加牛 α-乳白蛋白的婴幼儿配方奶粉，由于不同加工工艺等原因造成产品质量良莠不齐，但又没有建立准确有效的评价检测方法。目前国内、外用于牛α-乳白蛋白的检测方法仍以SDS-PAGE为主，该法为半定量方法，无法进行准确定量，由于操作繁琐无法在一般实验室进行推广；有人提出了应用GPC-UV的检测方法，由于分辨力差而只能用于高含量的原料检测；任一平等人建立了 RPLC-ESI-MS测定婴幼儿配方中的牛α-乳白蛋白的方法，样品经直接提�。莸鞍自诘缗缥砝胱踊跫禄岵嗟绾衫胱拥脑恚捎醚≡窭胱由枘Ｊ�(SIR)进行检测，因而只限于试样中非变性的牛α-乳白蛋白定量检测，而无法测定因加热而变性的牛α-乳白蛋白。经查询，至今为止还未发现可同时测定乳与乳制品中热变性和非变性牛α-乳白蛋白的准确方法。
发明内容
本发明旨在提供一种针对不同含量、基质的牛乳及其制品，可准确测定其中热变性和非变性的牛α-乳白蛋白含量的定量检测方法。本发明采用的技术方案是一种牛α -乳白蛋白的定量检测方法，所述方法包括(I)样品处理取待测样品I 2克，用水溶解并稀释至最终总蛋白含量约为lmg/mL,准确吸取 500 μ L样品溶液，加入20 μ L浓度为25 μ mo I/L的内标物溶液、480 μ L浓度为500mmol/L的 NH4HCO3溶液和10 μ L浓度为500mmol/L的DTT溶液，50°C恒温30min后取出冷却至室温， 加入30 μ L浓度为500mmol/L的IAA溶液，暗室静置30分钟，加入10 μ L浓度为IOOmmol/ L的CaCl2溶液和30 μ L浓度为100 μ g/mL的胰蛋白酶溶液，37°C恒温8小时酶解，取出酶解样液加入20 μ L甲酸，室温静置I小时后，将酶解液定容至2mL，所得溶液作为进样液进行下一步质谱分析；本发明方法适用于全部含牛α -乳白蛋白的样品，原料包括浓缩乳清粉、α -10乳清蛋白粉、脱盐乳清粉、生鲜乳等；产品包括婴幼儿配方粉、脱脂乳粉、全脂乳粉、高温杀菌奶、巴氏消毒奶、发酵型酸奶等。具体按如下比例加水进行溶解和稀释待测样品为配方奶粉时，取样品1.0克，加水溶解并定容至IOOml即可；待测样品为乳清白蛋原料时，取样品
1.O克，用水溶解并稀释至IL ;待测样品为液态乳时，取样品5克，用水稀释至IOOml即可。所述内标物为氨基酸序列为VKKILDKVGINNYWLAHKALCSEKL的肽段；(2)曲线配制配制牛0-乳白蛋白特征肽浓度分别为10、25、50、100、250、500、 1000nmol/L的标准品溶液，且在各浓度标准品溶液中加入相同浓度250nmol/L的内标特征肽；所述牛α -乳白蛋白特征肽为氨基酸序列为VGINYWLAHK的肽段；所述内标特征肽为氨基酸序列为VGINNYWLAHK的肽段；(3)分离检测将标准品溶液及样品酶解所得溶液在相同的液相色谱质谱条件下进行分离检测，得标准品溶液及检测样液中牛α-乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积；(4)浓度计算根据标准品溶液的浓度及其牛α -乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积，做线性回归，得线性方程I = kx+b，其中y为牛α -乳白蛋白特征肽与内标物特征肽的峰面积的比值为牛α -乳白蛋白特征肽的浓度，单位nmol/L ;再根据此方程及检测所得样液中牛α-乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积，将样液中牛α-乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积比值代入线形方程中，计算出样液中牛α -乳白蛋白特征肽的绝对浓度na ；(5)含量计算由公式I计算检测样品中牛α-乳白蛋白的含量Cx ；公式I :CX = 1(T1Q · M · N · na,其中Cx :样品中牛α-乳白蛋白的浓度，单位g/100g ;Μ:牛α-乳白蛋白分子量，14178g/mol ;N:样品稀释倍数；na :检测样液中牛α -乳白蛋白特征肽的绝对浓度,单位nmol/L。所述步骤⑶液相色谱分离条件如下色谱柱=BHl 300 C18色谱柱；柱温为40°C，流动相为0. 1% (v/v)的甲酸乙腈(溶剂为乙腈)和0.1% (v/v)的甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.3mL/min。所述步骤(3)质谱检测条件如下牛α-乳白蛋白特征肽的母离子为601m/z，子离子210m/z对应的碰撞能量为35eV，子离子llOm/ζ对应的碰撞能量为40eV ;内标物特征肽的母离子为659m/z，子离子210m/z对应的碰撞能量为40eV，子离子llOm/ζ对应的碰撞能量为45eV。所述步骤(3)质谱仪器条件如下毛细管电压3. 5kv，锥孔电压35kv，脱溶剂温度500 °C，脱溶剂气流量900L/min，锥孔反吹气流量30L/hr，碰撞室压力
3.OXlO^mbar ;低端分辨率I :2. 5V，高端分辨率I :15. 0V,离子能量I :0. 5 ;低端分辨率2
2.8V，高端分辨率2 :15. 0V，离子能量2 :1.0 ;离子源温度:150°C，提取器电压:3. 0V，入口透镜电压0. 5V，出口电压0. 5V，碰撞梯度1. O。本发明方法利用胰蛋白酶只作用于精氨酸(R)和赖氨酸(K)的专一性，把乳清蛋白酶切成分子量从几十至上千道尔顿的肽段分子，再从中选择只有牛α-乳白蛋白所特有的特征肽段分子作为定性和定量的目标肽段。本发明方法采用的装置为高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪，配备相应的控制软件，恒温水浴摇床或恒温箱，蛋白质序列合成仪，微量移液器。
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本发明的有益效果主要体现在1、本发明方法，样品处理操作简便，保证了结果的重现性，且易在一般实验室推广；样品分析速度快，经酶解的样品10分钟内便可获得结果， 可满足大批量样品检测的需求。2、本发明的方法使用经设计并合成的肽段为内标物，能够准确的对牛乳、配方粉及原料中的牛α-乳白蛋白进行定量，保证了结果的可靠性。3、本发明的方法可同时检测样品中非变性和热变性的牛α-乳白蛋白。4、本发明的方法所使用的试剂用量较少，检测成本较低。
图I为牛乳α -乳白蛋白三个特征肽段在完整氨基酸序列中的位置及理论酶解肽谱图；图2为本发明中所选内标特征肽段与牛α-乳白蛋白的线性比较图。图3为本发明中所选内标物质与牛α -乳白蛋白的酶解效率比较图。图4为本发明方法与文献所载方法对热变性牛α -乳白蛋白的适用性比较。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此实施例I :I.酶解条件的优化所述酶解条件是指经样品溶解，加入二硫苏糖醇(DTT)后的反应温度及时间，加入碘代乙酰胺(IAA)后的反应环境及时间，以及加入胰蛋白酶后的酶解温度、pH值及时间等；所发明的方法利用胰蛋白酶只作用于精氨酸(R)和赖氨酸(K)的专一性，把乳清蛋白酶切成分子量从几十至上千道尔顿的肽段分子，再从中选择只有牛α-乳白蛋白所特有的特征肽段分子作为定性和定量的目标肽段。最终的优化方法是取均匀性样品I 2g，用水稀释配制成总蛋白含量约为lmg/mL的溶液，然后准确吸取500 μ L，加入20 μ L内标和480 μ L NH4HCO3溶液，加入10 μ L 01!'溶液，501恒温301^11，取出冷却至室温，加入3(^1^ IAA溶液， 暗室静置30分钟，加入10 μ L CaCl2溶液和30 μ L胰蛋白酶溶液，37°C恒温8小时酶解，取出酶解样液加入20 μ L甲酸，室温静置I小时，最后将酶解液定容至2mL，取所得样液进质谱分析。2.牛α -乳白蛋白特征肽的寻找和确定将牛α -乳白蛋白标准物质，用水配置成浓度为lmg/mL的溶液，按优化的酶解条件进行酶解，对酶解物进行反相色谱分离和质谱全扫描。根据胰蛋白酶酶解的牛α-乳白蛋白理论肽谱，结合分析所获得的肽谱图(参见图I)，发现其中的三个特征肽段，肽段I是: ILDK，肽段2是EQLTK，肽段3是VGINYWLAHK。经理论查询在牛β -乳球蛋白，α、κ、 β-酪蛋白，大豆蛋白，谷物蛋白和碱性胰蛋白酶的氨基酸序列中不存在这三个肽段；经实验证明上述各种蛋白质的酶解产物在色谱分离、质谱检测过程中没有产生对肽段I、肽段 2和肽段3的干扰。经色谱及质谱的优化比较，最终选择肽段3作为牛α-乳白蛋白特征肽。3.本发明内标特征肽的设计与确定
根据牛α -乳白蛋白特征肽段的序列，以及其他的相关性质，设计并合成5个不同序列的肽段，为了避免在质谱检测过程中存在相互干扰，所合成肽段的质量数应与α-乳白蛋白特征肽的质量数相差20Da以上，但又要避免离子化过程中产生较大的差异。经实验结果表面氨基酸序列为VGINNYWLAHK的肽段与牛α -乳白蛋白特征肽VGINYWLAHK具有最相近的色谱分离行为和质谱离子化性质，最优选择。所选内标特征肽段与牛α-乳白蛋白特征肽段的性质比较主要进行了保留时间及线性斜率的比较，若两者性质越相似则其保留时间应越相近，而在质谱中则其离子化效率越相近，表现出响应值越接近。为此，配制相同浓度内标特征肽段与牛α-乳白蛋白特征肽段的标准系列工作溶液，进样分析，得各物质保留时间及线性回归方程，其中牛α-乳白蛋白特征肽段和内标特征肽段保留时间分别为3. 41min和3. 27min，可见两者色谱性质较为相近；所得牛α -乳白蛋白特征肽段和内标特征肽段的线性回归方程如图2，由图可知两者斜率相近，说明两者在相同质量浓度时的响应值相近，因而其在质谱的离子化、质量分析器1，碰撞破碎，质量分析器2，被检测的相应等过程中具有几乎相似的质谱行为表现。4.本发明内标物的设计与合成牛α-乳白蛋白被碱性胰蛋白酶酶解的过程中存在众多因素的影响，致使酶解效率不确定，为消除这些不确定因素对定量结果带来的影响，在已确定的内标特征肽的基础上，设计并合成了内标物VKKILDKVGINNYWLAHKALCSEKL，该内标物经碱性胰蛋白酶酶解可产生内标特征肽VGINNYWLAHK，且在相同的酶解条件下与牛α -乳白蛋白具有相近的酶解效率。为证明内标物质与牛α-乳白蛋白具有相近的酶解效率，进行了如下实验将牛α-乳白蛋白及内标物质用水及基质配制成相同摩尔浓度ΙΟμπιοΙ/L的溶液，分别准确吸取各溶液500 μ L，加入500 μ L NH4CO3溶液，加入IOyL DTT溶液，50°C恒温 30min，取出冷却至室温，加入30 μ L IAA溶液，暗室静置30分钟，加入10 μ L CaCl2溶液和 30 μ L胰蛋白酶溶液，37°C恒温8小时酶解，取出酶解样液加入20 μ L甲酸，室温静置I小时，最后将酶解液定容至2mL，得各物质对应的特征肽段理论浓度为2. 5ymol/L ;另外，取牛α -乳白蛋白特征肽和内标特征肽标准，用流动相配制成浓度均为2. 5 μ mol/L的标准工作溶液，用相同的色质谱条件进行分离检测，用标准工作溶液计算内标物质及牛α -乳白蛋白经酶解后对应特征肽段的浓度，并与理论值进行比较，得酶解效率，见图3。由图知，无论是在溶剂水中，还是样品基质中，内标物质与牛α-乳白蛋白均具有相近的酶解效率。5.色谱与质谱条件液相色谱分离条件色谱柱ΒΗ1 300 C18色谱柱；柱温为40°C，流动相为O. I %甲酸乙腈和O. 1%甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为O. 3mL/min。质谱条件牛α -乳白蛋白特征肽的母离子为601m/z，子离子210m/z对应的碰撞能量为35eV，子离子llOm/z对应的碰撞能量为40eV ；内标物特征肽的母离子为659m/z， 子离子210m/z对应的碰撞能量为40eV，子离子llOm/ζ对应的碰撞能量为45eV。毛细管电压3. 5kv，锥孔电压35kv，脱溶剂温度500°C，脱溶剂气流量900L/min，锥孔反吹气流量30L/hr，碰撞室压力3. 0X10_3mbar ;低端分辨率I :2. 5V，高端分辨率I :15. 0V，离子能量I :0. 5 ;低端分辨率2 :2. 8V，高端分辨率2 :15. 0V，离子能量2 :1. O ;离子源温度150°C， 提取器电压3. 0V，入口透镜电压0. 5V，出口电压0. 5V，碰撞梯度1. O。
6.结果计算(I)浓度计算根据标准系列溶液各点的浓度及峰面积，做线性回归，得线性方程 y = kx+b，其中y为牛α -乳白蛋白特征肽与内标物特征肽的峰面积的比值；χ为牛α -乳白蛋白特征肽的浓度，单位nmol/L;再根据此方程及检测所得样液中牛乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积计算出样液中牛α -乳白蛋白特征肽的绝对浓度na ;(5)含量计算由公式I计算检测样品中牛α-乳白蛋白的含量Cx ；公式I CX = 1(Γ10 · M · N · na,其中Cx :样品中牛α-乳白蛋白的浓度，单位g/100g ;Μ:牛α-乳白蛋白分子量，14178g/mol ;N:样品稀释倍数；na :检测样液中牛α -乳白蛋白特征肽的绝对浓度，单位nmol/L。实施例2 样品类型生鲜牛乳。取生鲜牛乳36ml，平均分成12管X2组，每管3ml，然后将其置于80°C恒温箱中加热，同组各管加热时间分别为0、15、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120min，加热处理过
的样品待至室温，2组样品分别按如下方法处理①文献所载方法准确称取I. Og热处理样品，加入500 μ L人乳内标溶液，用含
O.2% Triton X-100 的 0. 3mol/L NaCl 溶液稀释至 9ml，用 0. 2% TFA 溶液调 pH 值至 4. 6， 定溶至IOml,均质提取IOmin,静置30min,取2ml溶液于离心管中，15000r/min离心15分钟，取清夜过0. 22 μ m虑膜，进样，以选择区间扫描模式进行分析检测，牛α -乳白蛋白扫描区间为2357 2367m/z，人α -乳白蛋白扫描区间为2339 2349m/z，以内标法计算结果。②本发明方法取热处理样品0. 5g，用水稀释至10mL，准确吸取500 μ L稀释液，加入 20 μ L 25 μ mol/L 内标和 480 μ L 500mm。I/LNH4HCO3 溶液，加入 10 μ L 500mmol/L DTT 溶液，50°C恒温30分钟，取出冷却至室温，加入30 μ L 500mmol/L IAA溶液，暗室静置30分钟， 加入10 μ L IOOmmoI/L〇&(12溶液和3(^1^ 100 μ g/mL胰蛋白酶溶液，37°C恒温过夜酶解， 次日取出加入20 μ L纯甲酸，室温静置I小时，最后将酶解液定容至2mL，取所得样液按照实施例I方法进质谱分析，并用内标法计算结果(线性方程为I = 39. Olx+267. 77)。两者处理方法结果比较见图4，由图可知，加热处理后的样品，经方法一处理后检测，其牛α -乳白蛋白的量趋于同一水平；用方法二处理的样品，其牛α-乳白蛋白的量随加热时间的加长而逐渐减少。由此说明方法二既本发明方法可同时对样品中非变性和热变性的牛α-乳白蛋白进行定量检测。实施例3 样品类型市售婴幼儿配方奶粉。称样品I. Og于IOOmL容量瓶中，加温水溶解,待冷却至室温加水定容至刻度,准确吸取 500 μ L，加入 20 μ L 25 μ mol/L 内标和 480 μ L 500mmol/L NH4HCO3 溶液，加入 10 μ L 500mmol/L DTT溶液，50°C恒温30分钟，取出冷却至室温，加入30 μ L 500mmol/L IAA溶液，暗室静置30分钟，加入IOyL IOOmmoI/L CaCl2溶液和30 μ L 100 μ g/mL胰蛋白酶溶液，37°C恒温过夜酶解，次日取出加入20yL纯甲酸，室温静置I小时，最后将酶解液定容至2mL，取所得样液按照实施例I方法进质谱分析，并用内标法计算结果(线性方程为I=38. 36X+209. 17)，所测得样品中牛α-乳白蛋白的含量为I. 71g/100g，产品包装标注为 I.70g/100g。实施例4 样品类型市售α-乳白蛋白原料。称样品I. Og于IOOmL容量瓶中，加温水溶解，待冷却至室温加水定容至刻度，将样液稀释10倍后，再准确吸取500 μ 1，加入20 μ L 25 μ mol/L内标和480 μ I 500mmol/L NH4HCO3溶液，加入10 μ I 500mmol/L DTT溶液，50°C恒温30分钟，取出冷却至室温，加入 30 μ L 500mmol/L IAA 溶液，暗室静置 30 分钟，加入 10 μ L IOOmmoI/L CaCl2 溶液和 30 μ L 100μ g/mL胰蛋白酶溶液，37°C恒温过夜酶解，次日取出加入20 μ L纯甲酸，室温静置I小时，最后将酶解液定容至2mL，取所得样液稀释2倍后按照实施例I方法进质谱分析，并用内标法计算结果(线性方程为y = 38. 36X+209. 17)，所测得样品中牛乳白蛋白的含量为 36. 60g/100g，产品包装标注为α -乳白蛋白大于35g/100g。实施例5 样品类型生鲜牛乳。称样品5. Og于IOOmL容量瓶中，加水定容至刻度，准确吸取500 μ 1^加入201^ 25 μ mol/L 内标和 480 μ L 500mmol/L NH4HCO3 溶液，加入 10 μ L 500mmol/L DTT 溶液，50°C 恒温30分钟，取出冷却至室温，加入30 μ L 500mmol/L IAA溶液，暗室静置30分钟，加入 IOyL IOOmmoI/L CaCl2溶液和30 μ L 100 μ g/mL胰蛋白酶溶液，37°C恒温过夜酶解，次日取出加入20 μ L纯甲酸，室温静置I小时，最后将酶解液定容至2mL，取所得样液按照实施例 I方法进质谱分析，并用内标法计算结果(线性方程为I = 38. 36X+209. 17)，所测得样品中牛α-乳白蛋白的含量为91.7mg/100g。本发明的乳清蛋白定量检测方法的优点在于定量准确(定量限0.001g/100g)， 重现性(RSD < 7. 6% )、稳定性高(回收率98. 9 110.8% (η = 6))，样品处理简单，并可对非变性及热变性的牛α-乳白蛋白进行准确定量，可适用于不同牛α-乳白蛋白含量样品的定量检测。
权利要求
1.一种牛a-乳白蛋白的定量检测方法，所述方法包括(1)样品处理取待测样品I 2克，用水溶解并稀释至总蛋白含量为lmg/mL，准确吸取500 u L上述样品溶液，加入20 ii L浓度为25 u mo I/L的内标物溶液、480 u L浓度为 500mmol/L的NH4HCO3溶液和10 y L浓度为500mmol/L的DIT溶液，50°C恒温30min后取出冷却至室温，加入30 ii L浓度为500mmol/L的IAA溶液，暗室静置30分钟，加入IOuL浓度为lOOmmol/L的CaCl2溶液和30 y L浓度为100 u g/mL的胰蛋白酶溶液，37°C恒温8小时酶解，取出酶解样液加入20 y L甲酸，室温静置I小时后，将酶解液定容至2mL，所得溶液作为进样液进行质谱分析；所述内标物为氨基酸序列为VKKILDKVGINNYWLAHKALCSEKL的肽段；(2)曲线配制配制牛a-乳白蛋白特征肽浓度分别为10、25、50、100、250、500、 1000nmol/L的标准品溶液，并且在各浓度标准品溶液中加入相同浓度250nmol/L的内标特征肽；所述牛a -乳白蛋白特征肽为氨基酸序列为VGINYWLAHK的肽段；所述内标特征肽为氨基酸序列为VGINNYWLAHK的肽段；(3)分离检测将标准品溶液及样品酶解所得溶液在相同的液相色谱质谱条件下进行分离检测，得标准品溶液及检测样液中牛a-乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积；(4)浓度计算根据标准品溶液的浓度及峰面积，做线性回归，得线性方程y= kx+b，其中y为牛a-乳白蛋白特征肽与内标物特征肽的峰面积的比值；X为牛a-乳白蛋白特征肽的浓度，单位nmol/L ;再根据此方程及检测所得样液中牛a -乳白蛋白特征肽和内标物特征肽的峰面积，计算出样液中牛a -乳白蛋白特征肽的绝对浓度na ;(5)含量计算由公式I计算检测样品中牛a-乳白蛋白的含量Cx;公式 I =Cx = 10, M N na，其中Cx :样品中牛a -乳白蛋白的浓度，单位g/IOOg ;M:牛a-乳白蛋白分子量，14178g/mol ;N :样品稀释倍数；na :检测样液中牛a -乳白蛋白特征肽的绝对浓度，nmol/L。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述步骤(3)液相色谱分离条件如下色谱柱300 C18色谱柱；柱温为40°C，流动相为0. I %甲酸乙腈和0. I %甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0. 3mL/min。
3.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述步骤(3)质谱检测条件如下牛a-乳白蛋白特征肽的母离子为601m/z,子离子210m/z对应的碰撞能量为35eV,子离子110m/z对应的碰撞能量为40eV ;内标物特征肽的母离子为659m/z，子离子210m/z对应的碰撞能量为 40eV，子离子110m/z对应的碰撞能量为45eV。
4.如权利要求I所述的方法，其特征在于所述步骤(3)质谱仪器条件如下毛细管电压3. 5kv，锥孔电压35kv，脱溶剂温度500°C，脱溶剂气流量900L/min，锥孔反吹气流量30L/hr，碰撞室压力3. 0X10_3mbar ;低端分辨率I :2. 5V，高端分辨率I :15. 0V，离子能量I :0. 5 ;低端分辨率2 :2. 8V，高端分辨率2 :15. 0V，离子能量2 :1. 0 ;离子源温度150°C， 提取器电压3. 0V，入口透镜电压0. 5V，出口电压0. 5V，碰撞梯度1. O。
全文摘要
本发明涉及一种运用酶解-液相色谱质谱联用技术，对乳及乳制品中热变性和非变性的牛α-乳白蛋白进行定量检测的方法。包括如下步骤取一定量的乳或乳制样品，用水溶解，稀释成总蛋白含量约为1mg/mL的溶液。定容后准确吸取500μL，加入内标物，用二硫苏糖醇(DTT)还原二硫键，用碘代乙酰胺(IAA)烷基化保护被还原产生的巯基，再用胰蛋白酶进行恒温、恒时酶解；酶解产物用反相液相色谱分离，质谱多反应监测模式(MRM)进行检测，内标法计算结果。该方法的定量限为0.001g/100g；在添加水平为0.2、1.7、5.0g/100g时的回收率为98.9～110.8％(n＝6)；重现性RSD＜7.6％，可适用于不同牛α-乳白蛋白含量样品的定量检测。
文档编号G01N30/88GK102590413SQ20121001574
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月18日 优先权日2012年1月18日
发明者任一平, 张京顺, 蔡增轩, 赖世云, 韩见龙, 黄百芬 申请人:浙江省疾病预防控制中心
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