专利名称：一种温肾调经的中药制剂的检验方法
技术领域：
本发明涉及一种温肾调经的中药制剂的检验方法，属于中药制剂的质量控制检验方法领域。
背景技术：
所述一种温肾调经的中药制剂其组方来源本组方系由实践中来，是经过多年验证的经验方。国家级妇科主任医师柴嵩岩自1959年以来，在临床工作中主攻闭经、月经量少、月经稀发、不孕等病。经过近50年的治疗与研究，确已取得了良好的经验。尤其在近 10年中看到门诊病例中多囊卵巢综合征(PC0Q发病比例明显增多，结合现代科学检查，如盆腔B超、女性激素、基础体温等结合主要征象，在临床治疗工作中，已重点侧重于PCOS病的有关资料的积累，相关资料的参照，加以对脾肾不足、湿浊蕴结证的病机所引起的临床证型，做重点研究。在1997年已做为专题研究，并经过查新，尚无我们所提出通利法的有关记载，应该说是属于创新的。如1998年北京中医研究所硕士研究生黄玉华的毕业论文中写到，名老中医柴嵩岩根据多年经验，认为本病属脾肾不足、痰湿阻遏而发�。狙芯恳庠谔教制渚榉剑∑⒁嫔觯ɡ云⑸鲅粜樾蚉COS的治疗效果，并通过动物实验初步研究其作用机理，并对31例PCOS患者治疗3-6个月后，本研究实验结果显示疗后患者血清LH 和T水平明显下降，糖耐量实验恢复正常范围，排卵率为17%，总有效率为84%。动物实验结果表明，本方具有降低血清胰岛素和LGF-I水平，减轻体重，促进排卵。病理组织学和电镜结果提示，本方对卵巢的微循环有改善作用。在以上研究的基础临床工作中更加重了观察和研究力度，也有深入观察项目认真参阅现代医学及阶段性的反复总结，并对确诊为PCOS患者63例的中医诊断，如舌、脉象的重点观察及积累资料，已经明显地看出，无论其症状如何，或月经稀发、闭经，或出血，或肥胖，或多毛、痤疮等不同临床表现，而其脉象均为沉滑或沉细滑。中医学认为脉之应�。葬缙⑺ィ蛭逶嗔薏煌ㄓ谘觯煌膊≡诤艽蟪潭壬希鱿罂梢灾С秩现�。但是脉象又是相当复杂的，只有在大量的同一病种中找出规律，对诊断有参考意义的客观所见。如对PCOS患者的脉象做了初步的归纳，曾对较典型的PCOS病例的脉象如何，无论出血、闭经、肥胖、消瘦等，其脉象均呈现为沉滑无力或细滑。其中年龄20-35岁55人，35 岁以上或25岁以下者8人，患稀发8人，闭经37人，淋漓出血3人，其他症状者12人。其组方为当归6份、杜仲4份、肉苁蓉2. 5份、川弯1.5份、薏苡仁5份、茜草3份、 车前子5份、菟丝子6份、桂枝1份采用颗粒剂制法制成。功能主治为温肾养血，利温化浊， 祛瘀调经。用于肾阳不足，冲任血虚，湿浊瘀阻所致之月经后期，经量稀少，甚或经闭不通； 多囊卵巢综合征见上述证候者。
发明内容
本发明的目的是提供一种温肾调经的中药制剂的检验方法，检验方法中制定了当归、茜草、肉苁蓉和菟丝子的薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法，测定这种温肾调经的中药制剂中阿魏酸的含量，以克服现有技术的弊端，提高产品的质量、疗效、生物利用度，更好地满足医疗的需要。本发明的目的是通过如下技术方案实现的一种温肾调经的中药制剂的检验方法，其特征在于检验方法中包含有a鉴别方法和b含量测定方法a 鉴别当归薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂10_50g，研碎，加乙醇lO-lOOml， 超声处理10-50分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇I-IOml溶解，作为供试品溶液，另取当归对照药材l-10g，加乙醇10-50ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10-30 μ 1、对照药材溶液10-30 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10 5-15 0.5-5的甲苯-三氯甲烷-无水乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；菟丝子薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂5-20g，研细，加甲醇 lO-lOOml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇I-IOml溶解，滤过，滤液浓缩至I-IOml，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材l-10g，研碎，加甲醇l-50ml，超声处理1-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至l_15ml，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10 1-10 1-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；肉苁蓉薄层色谱鉴别取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g， 研细，加甲醇lO-lOOml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇I-IOml溶解，作为供试品溶液，另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每Iml含l-5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1_50μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以体积比5-50 1-10 1-5的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9%醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以l-10wt%三氯化铁乙醇溶液，在90-150°C加热至斑点显色清晰， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；茜草薄层色谱鉴别取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10_30g，研细，加甲醇lO-lOOml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至l_5ml，作为供试品溶液，另取茜草对照药材0. 5-5g，研碎，加甲醇l_30ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-20 μ 1， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-20 1-10的 60 90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 10-50 10-100的甲醇-体积比浓度5% HAC为流动相；流速1-lOml/min ；检测波长为 300-400nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000 ；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加体积比 1-5 1-10的甲醇体积比浓度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸1-20. OOyg的溶液， 作为对照品溶液；供试品溶液的制备取这种温肾养血，利温化浊，祛瘀调经的中药制剂，研细，取 l_5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加体积比1-10 5-20的甲醇体积比浓度5% HAC 混合溶液10-50ml，称重，超声处理10-60分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量， 滤过，取续滤液经微孔滤膜滤过，即得；测定法精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10-20 μ 1，分别注入液相色谱仪， 测定，即得；每袋含当归与川芎以阿魏酸CiqHiqO4计，暂定不得少于0. 5-1. Omg0本发明的有益效果本发明经过多次试验，检验方法中制定了当归、肉苁蓉、菟丝子和茜草的薄层色谱鉴别；采用高效相色谱法，测定这种温肾调经的中药制剂中阿魏酸的含量。通过建立明确专属性强的鉴别及重现性、稳定性及精密度良好的含量测定方法，能够有效控制这种温肾调经的中药制剂的质量，使其质量达到稳定、可控、高效及安全，是对产品的投料要求及质量控制严格，克服现有技术的不足，提高产品的质量、疗效、生物利用度， 产品质量高，能保证产品疗效，更好地满足医疗的需要。经含量测定方法学研究结果表明， 该方法专属性强，其它组分不干扰阿魏酸的测定；精密度测定、重复性测定、溶液的稳定性和加样回收率均符合《中药新药研究的技术要求》。
图1是本发明当归的薄层鉴别图；图2是本发明肉苁蓉的薄层鉴别图；图3是本发明菟丝子的薄层鉴别图；图4是本发明茜草的薄层鉴别图；图5是本发明阿魏酸对照品的高效液相图；图6是本发明这种温肾调经的中药制剂高效液相色谱图谱；图7是本发明阴性对照溶液的液相色谱图谱。在图1-4中，1、2、3均为供试品，4为对照品溶液，5为阴性对照溶液。
具体实施例方式实施例1 a 鉴别当归的薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂20g，研碎，加乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材lg，加乙醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液；按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液15 μ 1、对照药材溶液10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比6 9 1的甲苯-三氯甲烷-无水乙醇为展开剂，展开，取出、晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
菟丝子的薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂10g，研细，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1 aiil，作为供试品溶液；另取菟丝子对照药材lg，研碎，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1 ani，作为对照药材溶液；按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5 5 3的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；肉苁蓉的薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 2ml使溶解，作为供试品溶液；另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每Iml含2. 5mg麦角甾苷的溶液；按照薄层色谱法(中国药典 2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比20 3 2的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9% 醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5wt%三氯化铁乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；茜草的薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至1 aiil，作为供试品溶液；另取茜草对照药材lg，研碎，加甲醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液； 按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比4 1的60 90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b含量测定按照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比 20 80的甲醇-体积比浓度5% HAC为流动相，流速lml/min ；检测波长为323nm ；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，置棕色容量瓶中，按体积比1 4加甲醇-体积比浓度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸10. OOyg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取这种温肾调经的中药制剂，研细，取1.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，按体积比1 4精密加甲醇-体积比浓度5% HAC的混合溶液25ml，称重，超声处理40分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得；测定法精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20 μ 1，分别注入液相色谱仪，测定，即得。经测定后控制每袋含当归与川芎以阿魏酸(CltlHltlO4)计，暂定不得少于0. Smg0实施例2 a 鉴别当归薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂10g，研细，加乙酸乙酯-甲酸 9.5 0.5 50ml，超声40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液，另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比 8:2: 0.2的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；菟丝子薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂10g，研细，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1 aiil，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材lg，研碎，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1 ani，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 ο μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5 5 3的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；肉苁蓉薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 2ml溶解，作为供试品溶液，另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每Iml含2. 5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 ΙΟμΙ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比20 :3:2 的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9%醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5wt%三氯化铁乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；茜草薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至1 aiil，作为供试品溶液，另取茜草对照药材lg，研碎，加甲醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比4 1的60 90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比 20 80的甲醇-体积比浓度5% HAC为流动相；流速lml/min ；检测波长为323nm ；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加体积比1 4 的甲醇体积比浓度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸10. OOyg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取这种温肾调经的中药制剂，研细，取1. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加体积比1 4的甲醇体积比浓度5% HAC混合溶液25ml，称重，超声处理40分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经微孔滤膜滤过，即得；测定法精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20 μ 1，分别注入液相色谱仪，测定，即得；每袋含当归与川芎以阿魏酸CiqHiqO4计，暂定不得少于0. Smg0
实施例3 1.当归的薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂20g，研碎，加乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材lg，加乙醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液15 μ 1、对照药材溶液10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-无水乙醇(体积比6 9 1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。参照有关文献资料，结合本制剂的剂型及工艺特点，以当归为对照药材，并随行阴性(弃去当归)对照，鉴别这种温肾调经的中药制剂中的当归。结果表明供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上呈现相同的蓝色荧光斑点。按同工艺制备的不含当归的阴性对照液，同供试品方法提取、展开、显色，结果在与供试品及对照药材色谱相应的位置上，无斑点出现，证明方中其它味药无干扰、斑点清晰、专属性强，方法可行(见图1)。故收入标准部分。当归对照药材购自中国药品生物制品检定所，批号120927_200613。2.菟丝子的薄层色谱鉴别。据文献报道，菟丝子主含化学成分为黄酮类、香豆精类等。参照文献资料，结合本制剂的剂型及工艺特点，以菟丝子为对照药材，随行阴性对照 (弃去菟丝子)鉴别这种温肾调经的中药制剂中的菟丝子。结果表明供试品色谱中在与对照药材相应的位置上呈现相同的蓝色荧光斑点。按同工艺制备的不含菟丝子的阴性对照液，同供试品方法提供，展开，显色，结果在与供试品及对照药材相应的位置上，无斑点出现。证明方中其它药味无干扰，斑点清晰，分离度好，专属性强，方法可行。见图2。菟丝子对照药材购自中国药品生物制品检定所。批号121232-2004013.肉苁蓉的薄层色谱鉴别。肉苁蓉为本方中的主要组成药物。据文献报道，肉苁蓉所含的主要化学成分为多糖类、萜类及麦角留苷(毛蕊花糖苷)及甜菜碱类等。参照文献资料及《中国药典》2005年版一部肉苁蓉项下麦角留苷的薄层色谱鉴别方法及条件，以麦角甾苷为对照品，并设阴性对照(去掉肉苁蓉)。经实验研究证明供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置呈现相同蓝紫色斑点。按同工艺制备的不含肉苁蓉的阴性对照液，同供试品方法提�。箍陨峁谟牍┦云芳岸哉掌废嘤Φ奈恢蒙希薨叩愠鱿�。证明方中其它药味无干扰。薄层分离好，斑点清晰，方法可行。见图3。麦角甾苷由中国药品生物制品鉴定所提供。批号111530-2004044.茜草的薄层色谱鉴别。茜草已知含有蒽醌类成分，茜草素类等。参照有关文献资料，并经实验反复摸索，以茜草为对照药材，并随行阴性对照(去掉茜草)，鉴别这种温肾调经的中药制剂中的茜草。结果表明供试品色谱中在与对照药材相应的位置上呈现相同的荧光斑点。按同工艺制备的不含茜草的阴性对照液，同供试品方法提取，展开，显色，结果在与供试品及对照药材相应的位置上，无斑点出现。证明方中其它药味无干扰。斑点清楚， 方法可行。见图4。茜草对照药材购自中国药品生物制品检定所。批号121049-03015.含量测定这种温肾调经的中药制剂是由当归等九味中药组成的复方制剂。经提取方中组成药物的主要活性成分制成的颗粒剂。当归为本方中的君药，当归主含补血活血的有效成分为阿魏酸，成分明确，有关阿魏酸的分析检测方法技术成熟。故选择方中君药当归与方中另一组成药物川芎两者共含的主要有效成分-阿魏酸为检测指标，以高效液相色谱法测定其在这种温肾调经的中药制剂中的含量。经方法学考查证明方法灵敏，专属性强，结果满意， 方法可行。1)、仪器与试药(1)仪器岛津SCL-10AVP液相色谱仪(日本)，配有柱温箱，SPD-10AVP检测器， Class-VP工作站。(2)试剂与试药甲醇为色谱纯试剂，水为双重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。阿魏酸对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号110773-99102)、实验条件的选择(1)色谱条件的选择色谱柱Kromasil 5u 100A C18 柱(250X4. 6mm, 5 μ m)；流动相甲醇-5%醋酸(20 80)；流速lml/min ；柱温35°C ；检测波长:323歷。在上述选定的色谱条件下，阿魏酸与其它组分色谱峰可达到基线分离，分离度符合规定，理论板数按阿魏酸峰计在10000以上。且阴性样品无干扰。对照品、供试品及阴性样品色谱图见图5、图6、图7。在选择流动相时，曾参照文献试验了甲醇与不同浓度的醋酸(5%和2% )的不同比例以及甲醇与0. 磷酸的不同比例，结果表明，本法所确定的以甲醇-5%醋酸 (20 80)效果最佳。(2)提取条件的选择为增加阿魏酸的稳定性，选择甲醇5%HAC(1 4)混合溶剂作为提取溶剂。提取方法分别试验了超声处理法和回流提取法。结果见表1。表1不同提取方法阿魏酸测定结果
权利要求
1. 一种温肾调经的中药制剂的检验方法，其特征在于检验方法中包含有a鉴别方法和b含量测定方法 a鉴别当归薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂10-50g，研碎，加乙醇lO-lOOml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇I-IOml溶解，作为供试品溶液，另取当归对照药材l-10g，加乙醇10-50ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10-30 μ 1、对照药材溶液10-30μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10 5-15 0.5-5的甲苯-三氯甲烷-无水乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；菟丝子薄层色谱鉴别取这种温肾调经的中药制剂5-20g，研细，加甲醇lO-lOOml， 超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇I-IOml溶解，滤过，滤液浓缩至 I-IOml，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材l-10g，研碎，加甲醇l-50ml，超声处理1_50 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至l_15ml，作为对照药材溶液， 照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10 1-10 1-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂， 展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；肉苁蓉薄层色谱鉴别取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g，研细，加甲醇lO-lOOml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇I-IOml溶解， 作为供试品溶液，另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每Iml含l_5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1_50μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5-50 1-10 1-5的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9%醋酸为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以l-10wt%三氯化铁乙醇溶液，在90-150°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；茜草薄层色谱鉴别取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g，研细， 加甲醇lO-lOOml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至l_5ml，作为供试品溶液，另取茜草对照药材0. 5-5g，研碎，加甲醇l_30ml，超声处理 10-50分钟，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-20 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-20 1-10的60 90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； b含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10-50 10-100的甲醇-体积比浓度5% HAC为流动相；流速1-lOml/min ；检测波长为300-400nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加体积比 1-5 1-10的甲醇体积比浓度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸1-20. OOyg的溶液， 作为对照品溶液；供试品溶液的制备取这种温肾养血，利温化浊，祛瘀调经的中药制剂，研细，取l_5g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加体积比1-10 5-20的甲醇体积比浓度5% HAC混合溶液10-50ml，称重，超声处理10-60分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经微孔滤膜滤过，即得；测定法精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10-20 μ 1，分别注入液相色谱仪，测定， 即得。
全文摘要
本发明涉及一种温肾调经的中药制剂的检验方法，其特征在于检验方法中制定了当归、茜草、肉苁蓉和菟丝子的薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法，测定这种温肾调经的中药制剂中阿魏酸的含量。其优点是专属性高，检验方法稳定，通过对药物中的有效成分的精确检验和测定，能够有效的控制产品的质量。
文档编号G01N30/02GK102279242SQ20111011626
公开日2011年12月14日 申请日期2011年4月26日 优先权日2011年4月26日
发明者杨丽, 贾金良 申请人:包头中药有限责任公司
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