专利名称：急性心肌梗死检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测用的试剂盒，具体涉及一种急性心肌梗死检测试剂盒。
背景技术：
心肌肌钙蛋白I (cTnl)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位，存在于心肌肌原纤维细肌丝上， 相对分子质量为24 000，是心肌细胞特有的结构蛋白。在正常情况下，血液中cTnl的含量很 低，当一些病变引起心肌细胞损伤时，cTnl迅速弥散人血液中，致使血液中cTnl的含量迅速 升高。大量研究CTnT己被证实为心肌损伤最特异、最敏感的指标之一，是诊断急性心肌梗死 (acute myocardial infarction, AMI)的"金标准，，。
糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase， GPBB)为糖原分解的关键酶，在心肌细胞肌浆 网构成糖原分解复合物，该复合物对缺血引起的糖原分解特别敏感，使其构成发生改变，形 成可溶性GPBB，透过细胞膜进入血液，对急性心肌缺血的早期诊断优于心电图，是目前发现 的AMI病人胸痛发作后4小时内最敏感的指标。
常用的测定方法有放射性免疫法、高压液相色谱分析法、生化分析仪及各种诊断试剂盒。 这些方法需要仪器及专业人员的配备，且操作费时。同时传统的快检试剂条只能检测一个指 标，而实践中，往往需要同时检测多个指标，采用多个单项检测的试剂盒和试剂条分别操作 就显得繁琐费时。
发明内容
本实用新型要解决的技术问题是给出一种同时检测人心肌肌钙蛋白I/糖原磷酸化酶同 工酶BB的急性心肌梗死检测试剂盒，操作更为简便。针对cTnl与GPBB对AMI诊断的特点，将 GPBB和心肌特异性标志物cTnI结合起来,将对心肌缺血的早期诊断具有绝对特异性和高度 敏感性。
为解决上述技术问题，本实用新型采用了下述技术方案
一种急性心肌梗死检测试剂盒，包括底板、试剂条和盒盖，其中，底板上设有二个相互 平行的卡槽，二个卡槽内分别放置人心肌肌钙蛋白I检测试剂条和糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条，底板上设有与盒盖对应的卡槽或突起，底板可与盒盖扣合，盒盖上设有二个加样 孔及二个观测窗口。
上述人心肌肌钙蛋白I检测试剂条包括底部托板、吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和样品垫，其中，样品垫、玻璃纤维纸、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接并固定于底部 托板上。人心肌肌钙蛋白I检测试剂条中，硝酸纤维素膜与盒盖的一个观察窗口相对应，样 品垫与盒盖的一个加样孔相对应。硝酸纤维素膜上设有包被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的 检测线和包被有羊抗鼠多克隆抗体的质控线，玻璃纤维纸上固定有心肌肌钙蛋白I单克隆抗 体胶体金混合物。上述检测线和质控线相互平行，其中检测线近加样孔端，质控线远离加样
孑L端。
上述糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条包括底部托板、吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤 维纸和样品垫，其中，样品垫、玻璃纤维纸、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接并固定于 底部托板上。糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条中，硝酸纤维素膜与盒盖的一个观察窗口相 对应，所述样品垫与盒盖的一个加样孔相对应。硝酸纤维素膜上设有包被有糖原磷酸化酶同 工酶BB单克隆抗体的检测线和包被有羊抗鼠多克隆抗体的质控线，玻璃纤维纸上固定糖原 磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体胶体金混合物。上述检测线和质控线相互平行，其中检测线 近加样孔端，质控线远离加样孔端。
本实用新型可用于人心肌肌钙蛋白I/糖原磷酸化酶同工酶BB的体外诊断检测，对急性心 肌梗死的早期筛查有重要意义。
图1:急性心肌梗死检测试剂盒底板示意图 图2:急性心肌梗死检测试剂盒盒盖示意图
图3:人心肌肌钙蛋白I检测试剂和糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条结构示意图 图4:人心肌肌钙蛋白I检测试剂和糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条侧视图
具体实施方式
如图1和2所示急性心肌梗死检测试剂盒，包括底板l、试剂条和盒盖2，其中，底板l上 设有二个相互平行的卡槽3、 4， 二个卡槽内分别放置人心肌肌钙蛋白I检测试剂条5和糖原磷 酸化酶同工酶BB检测试剂条6，底板上设有与盒盖对应的卡槽或突起，底板可与盒盖扣合，
4盒盖上设有加样孔7及观测窗口8。
人心肌肌钙蛋白I检测试剂条结构如图3和4所示，包括底部托板9、吸水垫IO、硝酸纤维 素膜ll、玻璃纤维纸12和样品垫13，其中，样品垫13、玻璃纤维纸12、硝酸纤维素膜ll和吸 水垫i0依次首尾衔接并固定于底部托板9上。人心肌肌钙蛋白I检测试剂条中，硝酸纤维素膜 11与盒盖的观察窗口8相对应，样品垫13与盒盖的加样孔7相对应。硝酸纤维素膜ll上设有包 被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的检测线14和包被有羊抗鼠多克隆抗体的质控线15，玻璃纤 维纸12上固定有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体胶体金混合物。上述检测线14和质控线15相互平 行，其中检测线14近加样孔7端，质控线15远离加样孔7端。
上述糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条结构如图3和4所示，包括底部托板9、吸水垫IO、 硝酸纤维素膜ll、玻璃纤维纸12和样品垫13，其中，样品垫13、玻璃纤维纸12、硝酸纤维素 膜11和吸水垫10依次首尾衔接并固定于底部托板9上。糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条中， 硝酸纤维素膜11与盒盖的观察窗口8相对应，所述样品垫13与盒盖的加样孔7相对应。硝酸纤 维素膜11上设有包被有糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的检测线14和包被有羊抗鼠多克 隆抗体的质控线15，玻璃纤维纸12上固定糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体胶体金混合物。 上述检测线14和质控线15相互平行，其中检测线14近加样孔7端，质控线15远离加样孔7端。
上述急性心肌梗死检测试剂盒中使用的材料按如下方法制得
1. 单克隆抗体的制备
以人心肌组织为主要原材料分别提取纯化cTnl和GPBB作为免疫原，分别免疫BALB/c 小鼠，经初次免疫及多次加强免疫。分离小鼠的脾细胞并与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融 合，制得杂交瘤细胞。培养筛选出两株抗cTnl细胞株和两株抗GPBB细胞株。注入小鼠腹 腔诱生腹水后，纯化得心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I 、 II和糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆 抗体I、 II 。
2. 胶体金颗粒与单克隆抗体的结合
把心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I ，糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体I分别标记在红色 的胶体金颗粒上，固定在玻璃纤维纸上，干燥备用。
3. 包被硝酸纤维素膜
质控线由羊抗鼠多克隆抗体包被，检测线分别包被糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体 II 、心肌肌钙蛋白I单克隆抗体II。 上述急性心肌梗死检测试剂盒使用方法
用加样吸管吸取血清/血浆样品，然后滴3滴(约120ul)血清/血浆样品到试剂盒的每个
5加样孔中。每检测一份不同的样品注意要使用不同的吸管。在滴加样品后15分钟内判读结 果。只在结果观察窗口的质控线(C线)位置出现一条红色线条为阴性结果。在结果观察 窗口内出现两条色带，即检测线(T线)和质控线(C线)位置各出现一条红色线条，为阳 性结果。表示样品中有超过检出灵敏度的心肌钙蛋白I或糖原磷酸化酶同工酶BB存在。质 控线(C线)不出现表明测试结果是不确定的，应重试。
权利要求1.一种急性心肌梗死检测试剂盒，包括底板、试剂条和盒盖，其特征在于，底板上设有二个相互平行的卡槽，二个卡槽内分别放置人心肌肌钙蛋白I检测试剂条和糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条，底板上设有与盒盖对应的卡槽或突起，底板可与盒盖扣合，盒盖上设有二个加样孔及二个观测窗口。
2. 如权利要求l所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述人心肌肌钙蛋白I 检测试剂条包括底部托板、吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸和样品垫，其中， 样品垫、玻璃纤维纸、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接并固定于底部托板上。
3. 如权利要求2所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜与盒 盖的一个观察窗口相对应，所述样品垫与盒盖的一个加样孔相对应。
4. 如权利要求2所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设 有包被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的检测线和包被有羊抗鼠多克隆抗体的质控线， 所述玻璃纤维纸上固定有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体胶体金混合物。
5. 如权利要求4所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述检测线和质控线相 互平行，其中检测线近加样孔端，质控线远离加样孔端。
6. 如权利要求l所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述糖原磷酸化酶同工 酶BB检测试剂条包括底部托板、吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸和样品垫，其 中，样品垫、玻璃纤维纸、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接并固定于底部托板 上。
7. 如权利要求6所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜与盒 盖的一个观察窗口相对应，所述样品垫与盒盖的一个加样孔相对应。
8. 如权利要求6所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设 有包被有糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的检测线和包被有羊抗鼠多克隆抗体 的质控线，所述玻璃纤维纸上固定糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体胶体金混合 物。
9. 如权利要求8所述的急性心肌梗死检测试剂盒，其特征在于，所述检测线和质控线相 互平行，其中检测线近加样孔端，质控线远离加样孔端。
专利摘要本实用新型涉及一种急性心肌梗死检测试剂盒，包括底板、试剂条和盒盖，其底板上设有二个相互平行的卡槽，二个卡槽内分别放置人心肌肌钙蛋白I检测试剂条和糖原磷酸化酶同工酶BB检测试剂条，底板上设有与盒盖对应的卡槽或突起，底板可与盒盖扣合，盒盖上设有二个加样孔及二个观测窗口。本实用新型可同时定性检测人心肌肌钙蛋白I/糖原磷酸化酶同工酶BB二项指标，操作简便，弥补了传统心肌梗死诊断方法的不足，对于急性心肌梗死的早期筛查有重要意义。
文档编号G01N33/68GK201302572SQ20082015591
公开日2009年9月2日 申请日期2008年11月25日 优先权日2008年11月25日
发明者波 卫 申请人:上海市浦东新区人民医院
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
