专利名称：以Nur77-LKB1相互作用为靶点的抗糖尿病药物筛选方法
技术领域：
本发明涉及抗糖尿病药物的筛�。绕涫巧婕耙恢纸⒁訬ur77-LKB1蛋白相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法。
背景技术：
近年来，全球糖尿病(Diabetes)发病率增长迅速，糖尿病已成为继癌症、心血管疾病之后第三大严重威胁人类健康的慢性病。目前，全世界已有近1.8亿糖尿病患者。据世界卫生组织预计，到2025年，全球成人糖尿病患者人数将增至3亿，而中国糖尿病患者人数将达4000万，在未来的50年内糖尿病仍将是中国一个相当严重的问题。糖尿病可引起多种严重的慢性并发症，如糖尿病肾病、视网膜病变、糖尿病足、心肌梗塞等。这些并发症是造成糖尿病人死亡的主要原因。因此，治疗糖尿病的目标是通过各种方法控制血糖，延缓并发症的发生。糖尿病是由于体内胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引发的代谢紊乱综合症，临床上以高血糖和糖尿为主要特征。糖尿病可分为I型糖尿病和II型糖尿�。渲蠭I型糖尿病患者所占比例约为95%。目前，治疗II型糖尿病的药物主要有磺酰脲类、双胍类、α —葡萄糖苷酶抑制剂以及噻唑烷二酮类等，这些抗糖尿病药物在临床上虽然具有一定的疗效， 但是仍存在着疗效短、不能特异针对病因以及药物毒副作用等问题，因此，研发新型的抗糖尿病药物在临床上不仅十分迫切而且具有重要性。腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)广泛存在于各种真核细胞中，在调节肌体能量代谢的平衡方面起总开关作用。在肌肉和肝脏中，AMPK的活化增强了葡萄糖的摄取、脂肪酸氧化作用和胰岛素敏感性，并且减少了葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的产生(Hardie DG, et al.，J. Physiol.，2006，574，7-15 ；Viollet B, et al.， J. Physiol. ,2006,574,41-53 ；Hardie DG, et al.，Physiology.，2006，21，48-60)。 因此，AMPK被认为是治疗肥胖和糖尿病的一个非常重要的药理学靶点(Viollet B, et al., J.Physiol.，2006，574，41-53)。LKBl (又被称作 STKll(serine theonineproteinkinase 11))是AMPK在肝脏中的主要上游激酶。LKBl可以直接磷酸化AMPK α的苏氨酸172位而激活AMPK (Lizcano JM et al.，EMB0J，2004，23，833-843)。肝脏特异性敲除LKBl的小鼠表现为高血糖症状，其肝脏的 AMPKa 磷酸化活性很低(Shaw RJ, et al.，Science，2005，310，1642-1646)。因此，LKBl 对 AMPK的活性起着极为重要的调控作用。核孤儿受体(nuclearorphan rec印tor)Nur77 (也称 TR3、NGFI-B 或 NAK1)在细胞增殖、分化、凋亡、发育、能量代谢等过程中发挥重要的调控作用。研究表明，Nur77可以通过不同的途径调控葡萄糖代谢，例如，在肝脏中，Nur77可以通过转录调控刺激糖异生途径(Pei，L.，et al.，Nat. Med. 2006. 12，1048-1055)；而在骨骼肌中，Nur77 可以促进细胞对葡萄糖的摄�。⒃銮科湟鹊核孛舾行�(Fu, Y.，et al.，J. Biol. Chem. 2007. 282， 31525-31533)。因此，Nur77被认为是治疗糖尿病的潜在靶点。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种蛋白-蛋白相互作用靶点。本发明的第二目的在于提供一种Nur77-LKB1相互作用的检测方法。本发明的第三目的在于提供一种Nur77-LKB1相互作用靶点的用途。本发明的第四目的在于提供一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物(化合物)的方法。所述蛋白-蛋白相互作用靶点为孤儿受体Nur77与腺苷酸活化蛋白激酶AMPK的上游激酶LKBl间的相互作用，即Nur77-LKB1相互作用。所述Nur77-LKB1相互作用的检测方法选自但不限于(1)细胞分子生物学检测方法；或(2)化学生物学检测方法。所述细胞分子生物学检测方法可选自免疫共沉淀方法、GST-pull down方法等中的一种。所述化学生物学检测方法可选自荧光滴定法、BIAcore方法等中的一种。所述一种Nur77-LKB1相互作用靶点的用途，即以Nur77_LKBl相互作用为靶点在筛选抗糖尿病药物的应用。所述一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物(化合物)的方法包括以下步骤(1)将候选化合物与所述Nur77-LKB1相互作用的检测方法中的物质实体接触；(2)观察候选化合物对所述Nur77-LKB1相互作用的检测方法中的检测结果的影响，其中，若候选化合物能够使细胞内的检测结果发生负向改变，即表征Nur77-LKB1相互作用能力减弱，则表明该化合物是抗糖尿病的潜在药物(化合物)。在步骤(1)中，所述物质实体可选自细胞、体外表达纯化的蛋白质等中的一种。所述以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物(化合物)的第二种方法为选择能提高正常肝细胞内AMPKa磷酸化水平的化合物。所述以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物(化合物)的第三种方法为(1)将候选化合物与正常肝细胞接触；(2)观察候选化合物对正常肝细胞内AMPKa磷酸化水平的影响。所述以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物(化合物)的第四种方法为对获得的潜在化合物进行进一步的II型糖尿病小鼠模型实验，以选出有效抗糖尿病的药物(化合物)。由于Nur77通过负调控AMPK磷酸化促进糖异生，从而调控机体的糖代谢。Nur77 定位于细胞核，通过与LKBl结合，导致LKBl滞留在细胞核内，从而抑制了 LKBl与定位于细胞浆中的AMPKa结合，进而抑制LKB UfAMPKa的磷酸化。这一新发现为代谢性疾病的治疗提供了一个新靶点，即通过筛选抑制Nur77-LKB1相互作用的药物，可以达到激活AMPK α磷酸化，进而降低血糖的目的。本发明建立了 Nur77-LKB1蛋白相互作用检测系统，并能够从候选化合物中筛选出能够抑制Nur77-LKB1相互作用的化合物，从而为抗糖尿病新药开发提供一个有利的技术平台。重要的是，针对这一靶点的药物，将可能解决现有的抗糖尿病药物靶点特异性不强、副作用强及药物毒性等问题，从而为治疗糖尿病提供更好的治疗手段。本发明的主要优点在于1)提供一种Nur77-LKB1相互作用用于筛选抗糖尿病药物的用途。2)本发明的方法包含了 3个层层递进的筛选方法，筛药机理明确，作用效果直观， 系统稳定，结果可靠，可应用于药物开发前沿，及建立化合物规模筛选的技术平台。
图1为免疫共沉淀方法筛选抑制Nur77-LKB1相互作用的化合物。实验结果表明，HPQl和TAPAl可以有效抑制Nur77与LKBl蛋白的相互作用，且TAPAl抑制能力更强。 HA-Nur77和Flag-LKBl质粒共同转染293T细胞，24h后用待筛选化合物处理细胞(6h， 20 μ Μ)，然后常规收集细胞，并用Flag抗体进行免疫沉淀实验(Co-immunoprecipitation assay)，然后用免疫印迹实验(Western blotting)检测免疫沉淀复合物中HA_Nur77和 Flag-LKBl的蛋白水平。图2为待筛选化合物对鼠正常肝细胞AML12的AMPK α磷酸化水平的影响。实验结果表明，HPQl和TAPAl可以提高AMPK α的磷酸化水平，但不会影响AMPK α蛋白的表达水平，且TAPAl的激活能力更强。分别用待筛选化合物(10 μ Μ)及其溶剂DMSO处理AML12 细胞12h。用免疫印迹实验(Western blotting)检测AMPK α的磷酸化水平(p-AMPK α )和 AMPK α蛋白表达水平(ΑΜΡΚ α )。图3为TAPAl作用下II型糖尿病小鼠模型db/db小鼠血糖的变化。实验结果表明，TAPAl可以降低db/db小鼠的空腹血糖水平。横坐标为时间time (days)，纵坐标为血糖值Blood glucoselevels(mM)；白色柱体代表溶剂对照组(η = 8)，黑色柱体代表TAPAl 实验组(η = 8)。应用SPSS13. 0统计软件对实验数据进行统计分析，所得实验数据以均数士标准误差表示；对照组与实验组差异分析采用两因素方差分析及fisher检验，*表示ρ <0. 05，具差异显著性。图4为TAPAl对db/db小鼠肝脏AMPK α磷酸化水平的影响。实验结果表明，TAPAl 可以显著提高db/db小鼠肝脏中AMPKa的磷酸化水平。“_”表示溶剂对照组，“ + ”表示 TAPAl实验组；p-AMPK α和AMPK α分别代表小鼠肝脏AMPK α的磷酸化水平和AMPK α的蛋白水平。图5为TAPAl对db/db小鼠肝脏糖异生关键酶基因表达的影响。实验结果表明 TAPAl可以显著抑制db/db小鼠肝脏糖异生关键酶G6pc和P印ck基因的表达水平。G6Pase 葡萄糖-6-磷酸酶，P印ck:磷酸烯醇型丙酮酸羧化激酶。横坐标分别代表葡萄糖-6-磷酸酶(G6paSe)和磷酸烯醇型丙酮酸羧化激酶(Pepck)，纵坐标为基因表达水平的相对倍数(mRNA relativeexpression level)；白色柱体代表溶剂对照组(η = 8)，黑色柱体代表 TAPAl实验组(η = 8)。应用SPSS13. 0统计软件对实验数据进行统计分析，所得实验数据以均数士标准误差表示；对照组与实验组差异分析采用两因素方差分析及fisher检验，*表示ρ <0. 05，具差异显著性。
具体实施例方式蛋白-蛋白相互作用靶点本发明提供了一种蛋白_蛋白相互作用靶点，即Nur77-LKB1相互作用靶点。本发明通过常规手段(但不限于)可检测该相互作用，并可观察候选化合物对该相互作用的影响，用于筛选抗糖尿病的化合物。所述的检测Nur77-LKB1的相互作用的手段包括但不限于免疫共沉淀、GST-pull down、荧光滴定法、BIAcore。只要适用于检测两种蛋白间相互作用的其它方法也被包含在本发明中。作为本发明的优选方式，所述的检测方法是免疫共沉淀方法。该方法的优点是， 使活细胞与候选化合物接触，能最大限度的维持蛋白质的天然构象，结果更可靠。筛选方法所述的筛选方法是Nur77-LKB1的相互作用检测方法，可以是细胞水平上的检测方法，也可以是对体外表达纯化的蛋白质进行检测的方法。通过在细胞培养物中加入候选化合物，或者使体外纯化表达的蛋白质与候选化合物接触产生作用，观察候选化合物对所述的Nur77-LKB1相互结合的影响，从而筛选潜在的抗糖尿病化合物。因此，本发明还提供一种以Nur77-LKB1的相互作用为靶点的筛选抗糖尿病的潜在药物(化和物)的方法，所述方法包括步骤(a)将候选化合物与所述的相互作用检测方法中的物质实体(如细胞，体外表达纯化的蛋白质)接触；(b)观察候选化合物对所述的相互作用检测方法中的检测结果的影响；其中，如果候选化合物能够使细胞内的检测结果发生负向改变，即表征 Nur77-LKB1相互作用能力减弱，则表明该化合物是抗糖尿病的潜在药物(化合物)。作为本发明的优选方式，本发明将分别携带所述的两种蛋白的编码序列的重组载体瞬时共同转染哺乳动物细胞，通过免疫共沉淀方法检测所述两种蛋白间的相互作用，筛选潜在的抗糖尿病药物。为了实现上述目的，本发明采用了以下技术Nur77表达载体及 LKBl表达载体的构建；Nur77表达载体、LKBl表达载体瞬时共同转染系统的构建；免疫共沉淀方法检测Nur77-LKB1相互作用。通过上述方法初步筛选出的化合物可构成一个筛选库，以便于最终可以从中选择到对调节糖代谢有用的药物。在另一优选例中，所述的方法还包括选择能提高正常肝细胞内AMPKa磷酸化水平的化合物。所述方法包括步骤(a)将候选化合物与正常肝细胞接触；(b)观察候选化合物对正常肝细胞内AMPKa磷酸化水平的影响。通过上述方法，可以对由相互作用检测方法中初步筛选到的化合物进行进一步的筛选或验证。在另一优选例中，所述的方法还包括步骤对如上获得的潜在化合物进行进一步的II型糖尿病小鼠模型实验，以选出有效抗糖尿病的药物(化合物)。通过上述方法，可从上两次筛选出的潜在化合物中选择到抗糖尿病药物(化合物)。以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的优选实施方法与材料仅做示范之用。实施例1采用免疫共沉淀及免疫印迹分析(Western blotting)方法进行抑制Nur77_LKBl 相互作用的化合物筛选。试验方法如下1)细胞转染与药物处理将细胞接种于直径6em的培养盘，24h后转染，转染前细胞换新鲜的培养液。转染步骤为取1. 5mL离心管，依次加入水180 μ L，相应质粒，2. 5Μ CaCl220 μ L，HBS 200 μ L，轻柔混勻后，于室温静置15 30min，随后缓慢滴加到培养液中，轻轻晃动培养盘，使分布均勻。转染36h后，将细胞培养液换为无血清的DMEM(Dulbecco，s Modified Eagle's Medium)，并加相应的药物处理。对照组同时换液，并加入等体积的药物溶剂二甲基亚砜 (DMSO)处理，以确保培养条件及溶剂影响一致。药物处理结束后，常规收集细胞以用于后续实验。溶液配方HBS :280mM NaCl，IOmM KCl，1. 5mM Na2HPO4,12mM Glucose,50mM HEPES, ρΗ7·052)免疫共沉淀a.弃去培养液，以PBS洗一次，经胰酶消化后用含血清的培养液终止。将细胞悬起，吸入离心管中，40C，1200 1500rpm离心7min，弃上清，细胞团保存于_80°C备用。b.加入 600 μ L细胞裂解液Buffer A(50mM Tris,pH 7. 4,300mM NaCl, 1 % NP-40, 临用前加ImM PMSF和全酶抑制剂Cocktail)，然后用超声波破碎细胞，并于13000rpm，4°C 离心30min ；c.将上清吸出，取10 %作为总蛋白(Input)，剩下的加入5 μ L protein A-agarose和5 μ L相应的一抗，于4°C孵育3h ；d. 40C，3000rpm 离心 3min，之后弃去上清；e.向管中加入Iml BufferA，轻柔颠倒20次以洗去非特异结合蛋白，并于4°C， 3000rpm离心3min ；此步骤重复3次；弃尽上清，加入一定量(约30ul)的 lysis buffer 和 2XLaemmli，95°C煮 5min， 待进行Western-blot检测。3) Western-blot 检测a.蛋白电泳取20-40 μ g蛋白样品，加等体积2 X SDS样品缓冲液，95 V煮沸5min，于不连续 SDS-PAGE胶中电泳，电压100V，待样品进入分离胶后将电压调为150V。b.电转移电转液于4°C预冷，切好胶后将同样大小的甲醇预处理的PVDF膜以及滤纸浸于电转液中；PVDF膜贴于胶后，两面覆盖滤纸，赶尽气泡，按膜朝正极的顺序装于电转槽中，于-20°C 电转(100V，60min)。c.抗原抗体反应①封闭封闭液室温封闭Ih ；②一抗反应封闭后膜与相应一抗于室温孵育1 3h ；③二抗反应TBST洗3次，每次5min，之后加入相应的二抗，于室温孵育1 3h。d. ECL 检测TBST洗3次，每次lOmin。ECL的A液和B液以1 1 (WV)混和，于暗室中滴加于膜表面，孵育Imin后曝光。试验结果如下如图1所示，LKBl能结合Nur77 ；当用化合物HPQl和TAPAl处理细胞后， LKB1-Nur77的相互结合被显著的抑制，且TAPAl的抑制能力比TAPAl更强；而当用化合物 HPQ2和HPQ4处理细胞后，LKBl_Nur77的相互结合不受影响；试验结果表明，化合物HPQl和TAPAl可以抑制LKBl与Nur77的结合，且TAPAl的抑制能力更强。实施例2在进一步筛选方法中，采用免疫印迹分析(Western blotting)方法检测实例1中待筛选化合物对鼠正常肝细胞AML12中AMPK α磷酸化水平的影响。试验方法如下1)细胞裂解细胞接种在培养板上，培养24h后以药物处理适当时间后，弃去培养液，用PBS缓冲液洗一次，然后加入含ImM的PMSF和Cocktail (临用前加，每100 μ L裂解液加1 μ L) 的 Iysisbuffer 细胞裂解液(50mM HEPES(pH 7. 4)，IOOmM NaCl, 10 % glycerol, 1 % Triton-X-100,1. 5mM MgCl2, 25mM NaF) 400 μ L，冰上超声破碎，4°C，13000rpm离心 30min后收集上清液，测蛋白浓度后进行western blotting检测(方法参照实例1)。2)蛋白浓度的测定a. 96孔板中每孔加200 μ L Bradford蛋白测定液，每组设3孔；b.空白每孔加2 μ L Lysis buffer裂解液混勻；c.标准每孔加 2 μ L 浓度为 lmg/mL 的 BSA (溶于 Lysis Buffer)；d.样品每孔加2 μ L混勻；e.于酶标仪测OD 595，计算样品浓度。试验结果如下如图2所示，HPQl和TAPAl可以显著提高AMPK α的磷酸化水平，但不会影响 AMPK α蛋白的表达水平，且TAPAl的激活能力更强；HPQ2和HPQ4不影响AMPK α的磷酸化水平及蛋白水平。试验结果表明，化合物HPQl和TAPAl能有效提高AMPK α的磷酸化水平，且TAPAl 的激活效果更强，与实例1中的LKB1-Nur77相互作用抑制剂筛选结果相吻合。实施例3采用小鼠尾静脉采血测定血糖方法测定TAPAl对II型糖尿病小鼠模型db/db小鼠的降血糖能力。
试验方法如下取16只高血糖的db/db小鼠(雄性，8周龄)，随机分为实验组(TAPA1给药组；先将TAPAl溶于DMSO配成IM母液，然后取所需量与3倍体积的乳化剂Tween-80混合均勻， 静置15min后，缓慢加入生理盐水，轻弹使TAPAl-DMSO-Tween-80混合物缓慢地溶入生理盐水中以形成水溶液)和对照组(溶剂组用DMSO取代TAPA1-DMS0溶液，配置方法同上)。 采取腹腔注射的方式给药，TAPAl剂量为50mg/kg，溶剂组小鼠注射与实验组同体积的配置好的溶剂，每天一次，连续注射15天后禁食小鼠18h，再尾静脉取血，用血糖仪测其空腹血糖值。试验结果如下如图3所示，药物处理前，对照组和实验组小鼠的空腹血糖水平基本没有差异(P > 0. 05)；但是经TAPAl处理15天后，db/db小鼠的空腹血糖水平显著降低(ρ < 0. 05)试验结果表明，TAPAl能显著降低II型糖尿病模型db/db小鼠的饥饿血糖水平。实施例4采用Western bloting和Realtime PCR的方法检测TAPAl处理后，db/db小鼠肝脏中AMPKa的磷酸化水平以及糖异生途径关键酶基因表达的变化。试验方法如下将实施例3中经TAPAl处理15天的小鼠断颈处死，取肝脏进行如下试验。1)组织总蛋白提取与Western blotting 用实施例2中试验方法中的细胞裂解液将小鼠肝脏组织在冰上勻浆研磨(0. Ig组织用Iml裂解液勻浆)并超声裂解，4°C，13000rpm离心30min后收集上清液，即所需的蛋白溶液。蛋白浓度测定以及Western blotting的操作步骤则参照实施例2的试验方法。2)组织总RNA提取与实时荧光PCR(Realtime-PCR)总RNA提取实验方法参照Qiagen公司的RNeasy Mini Kit使用说明书。RNA提取后，用的琼脂糖凝胶电泳及分光光度计测定所获总RNA的质量和浓度。质量好的RNA在电泳检测时可见两条亮带，分别为28S和18SRNA，且前一条带亮于后一条。分光光度计测定所获RNA的纯度，一般要求A260/A280的比值大于1. 8。使用Fermentas逆转录酶，以总RNA为模板，逆转录合成cDNA。实验步骤如下加入 2 μ g RNA 样品，1 μ L dT18 (50 μ Μ)，加无 RNAase 的 H2O 至 15 μ L 混勻，70°C放置 5min 变性 RNA，迅速置于冰上 2min。加入 5 μ L 的 5 XFrist-Strand buffer, 1. 25 μ L 无 RNA 酶的 dNTP(10 μ Μ), 1 μ L RNA酶抑制剂及1 μ L逆转录酶，40°C条件下反应60min，最后分装样品并冻存于_20°C待用。以CDNA为模板，用Realtime-PCR方法检测糖异生通路中相关基因mRNA的表达水平。引物序列为 G6pc Sense 5 ‘ -CACCGACTACTACAGCAACAGC-3 ‘，Antisense 5 ‘ -ATCCCAACCACAAGATGACG-3 ‘ ；Pepck=Sense 5 ‘ CATTGAGGGTATCATCTTTGGTGG 3 ‘， Antisense 5' CAGGTATTTGCCGAAGTTGTAGC 3‘。试验结果如下如图4所示，TAPAl处理后，db/db小鼠肝脏中AMPK α的磷酸化水平显著提高。如图5所示，TAPAl处理后，db/db小鼠肝脏中糖异生途径关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(G6pc)和磷酸烯醇型丙酮酸羧化激酶(Pepck)的基因表达水平被显著抑制。
试验结果表明，TAPAl能显著提高II型糖尿病模型db/db小鼠肝脏中AMPKa的磷酸化水平以及显著降低其肝脏糖异生途径关键酶的基因表达水平。
权利要求
1.一种蛋白-蛋白相互作用靶点，其特征在于为孤儿受体Nur77与腺苷酸活化蛋白激酶AMPK的上游激酶LKBl间的相互作用，即Nur77-LKB1相互作用。
2.—种Nur77-LKB1相互作用的检测方法，其特征在于选自(1)细胞分子生物学检测方法；或(2)化学生物学检测方法。
3.如权利要求2所述的一种Nur77-LKB1相互作用的检测方法，其特征在于所述细胞分子生物学检测方法选自免疫共沉淀方法或GST-pull down方法。
4.如权利要求2所述的一种Nur77-LKB1相互作用的检测方法，其特征在于所述化学生物学检测方法选自荧光滴定法或BIAcore方法。
5.一种Nur77-LKB1相互作用靶点的用途，即以Nur77_LKBl相互作用为靶点在筛选抗糖尿病药物的应用。
6.一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法，其特征在于包括以下步骤(1)将候选化合物与所述Nur77-LKB1相互作用的检测方法中的物质实体接触；(2)观察候选化合物对所述Nur77-LKB1相互作用的检测方法中的检测结果的影响，其中，若候选化合物能够使细胞内的检测结果发生负向改变，即表征Nur77-LKB1相互作用能力减弱，则表明该化合物是抗糖尿病的潜在药物(化合物)。
7.如权利要求6所述的一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法，其特征在于在步骤(1)中，所述物质实体选自细胞、体外表达纯化的蛋白质中的一种。
8.—种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法，其特征在于为 选择能提高正常肝细胞内AMPKa磷酸化水平的化合物。
9.一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法，其特征在于为(1)将候选化合物与正常肝细胞接触；(2)观察候选化合物对正常肝细胞内AMPKa磷酸化水平的影响。
10.一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法，其特征在于为 对获得的潜在化合物进行进一步的II型糖尿病小鼠模型实验，以选出有效抗糖尿病的药物。
全文摘要
以Nur77-LKB1相互作用为靶点的抗糖尿病药物筛选方法，提供一种蛋白-蛋白相互作用靶点、相互作用的检测方法、相互作用靶点的用途和以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法。蛋白-蛋白相互作用靶点为孤儿受体Nur77与腺苷酸活化蛋白激酶AMPK的上游激酶LKB1间的相互作用。Nur77-LKB1相互作用的检测方法选自细胞分子生物学检测方法或化学生物学检测方法。以Nur77-LKB1相互作用为靶点在筛选抗糖尿病药物的应用。筛选方法将候选化合物与Nur77-LKB1相互作用的检测方法中的物质实体接触；观察候选化合物对Nur77-LKB1相互作用检测方法中结果的影响。
文档编号G01N33/68GK102305863SQ201110200520
公开日2012年1月4日 申请日期2011年7月18日 优先权日2011年7月18日
发明者占艳艳, 吴乔, 田敏, 郑忠辉, 陈航姿, 陈艳 申请人:厦门大学
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