专利名称：用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，属于生物技术领 域。
背景技术：
慢性阻塞性肺病(COPD)是一种以持续阻塞来自肺部的气流为特征的肺部疾病。 该疾病是一种阻碍正�：粑艺锒喜蛔阃采姆尾。俏薹ㄍ耆赡娴�。其主要的临 床表现为，咳嗽，咳痰以及呼吸困难。随着病程的进展，可发展到走平路时亦感到气急。部 分患者有喘息症状。此外尚有乏力、纳差和体重减轻等全身症状。急性发作期并发呼吸衰 竭或由心衰竭可出现相应症状。由于其患病人数多，死亡率高，社会经济负担重，已成为一 个重要的公共卫生问题。慢性阻塞性肺病目前居全球死亡原因的第4位，据世界卫生组织 报道，至2020年慢性阻塞性肺病将位居世界疾病经济负担第5位。在我国，慢性阻塞性肺 病同样是严重�：θ嗣裆硖褰】档闹匾院粑低臣膊。虼耍剿骶哂姓锒霞壑档男� 型简易生物标记物不仅有益于慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)患者的早期诊断和早 期干预，还会带来巨大的社会效益和经济效益。慢性阻塞性肺病的发病机制尚未完全明了。目前普遍认为慢性阻塞性肺病以气 道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征。随着病情进展，可导致全身炎症，出现循环血液中 细胞因子浓度异常增高等。目前诊断慢性阻塞性肺病急性加重的主要是依据症状体征以及 肺部影像学的改变。因此，用于诊断慢性阻塞性肺病特别是慢性阻塞性肺病加重期、评价疗 效的特征性生物标记物一直在开发探索中，以期监测慢性阻塞性肺病病程进展。近年来，随 着人们对慢性阻塞性肺病的重新认识和不断重视，如何更加准确地诊断慢性阻塞性肺病以 及急性加重期，以及如何优化现有预测指标指导该疾病的治疗等问题显得尤为紧迫。因此， 从多角度探索和开发对该疾病具有早期诊断价值的生物标记物拥有十分广阔的前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够预测慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒。为了达到上述目的，本发明提供了一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试 剂盒，其特征在于，包括细胞因子及其酶标抗体，所述的细胞因子包括人淋巴组织趋化性细 胞因子(6Ckine)、巨噬细胞源趋化因子(MDC)和β细胞素(BTC)。所述的人淋巴组织趋化性细胞因子为单克隆鼠IgG抗体。所述的巨噬细胞源趋化 因子为单克隆鼠IgG2B抗体。所述的β细胞素(BTC)为单克隆鼠IgG1抗体。所述的人淋巴组织趋化性细胞因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。所述的 巨噬细胞源趋化因子的酶标抗体为多克隆鸡抗人IgY抗体。所述的β细胞素的酶标抗体 为多克隆羊抗人IgG抗体。所述的细胞因子还包括人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK)、人上皮中性粒细胞 活化肽78 (ΕΝΑ-78)、人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白介素^A (IL-28A)、白介素四(IL-29)和酪氨酸激酶Axl (Axl)0所述的人皮肤T细胞虏获趋化因子为单克隆鼠抗体IgG2抗体。所述的人上皮中性 粒细胞活化肽78为单克隆鼠IgGl抗体。所述的人巨噬细胞移动抑制因子为单克隆鼠IgGl 抗体。所述的白介素28A为单克隆鼠IgG2B抗体。所述的白介素四为单克隆鼠IgG2A抗 体。所述的酪氨酸激酶Axl为单克隆鼠IgGl抗体。所述的人皮肤T细胞虏获趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗鼠IgG抗体。所述的 人上皮中性粒细胞活化肽78酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。所述的人巨噬细胞移动 抑制因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。所述的白介素28k的酶标抗体为多克隆羊 抗人IgG。所述的白介素四的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。所述的酪氨酸激酶Axl 的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒还可以包括PH值为9. 6的 碳酸盐缓冲液，PH值为7. 4的磷酸盐缓冲液，血清蛋白稀释液，终止液，四甲基联苯胺底物 溶液，正常人血清和阳性对照血清。本发明通过收集7例慢性阻塞性肺病急性加重期患者血浆、5例慢性阻塞性肺病 稳定期患者血浆，以及5例正常人血浆。利用定量细胞因子芯片技术，该技术采用免疫学原 理，通过抗体包被抗原，检测得到血浆内40种细胞因子，同时以稳定期慢性阻塞性肺病患 者及正常人血清中蛋白表达水平作为衡量标准，筛选慢性阻塞性肺病急性加重期患者血清 中上调或下调的细胞因子(P<0. 05)。根据标准曲线计算得到每种细胞因子的浓度。应用 SPSS 18. 0软件，计算得到每种细胞因子在每组人群中的均值和标准差，对所得每组数据进 行配对t检验，即分别比较慢性阻塞性肺病急性加重期组与稳定期慢性阻塞性肺病组和正 常组的数据，认为P<0. 05有统计学意义。最终确定慢性阻塞性肺病急性加重期患者血清蛋 白谱中有3种细胞因子表达与慢性阻塞性肺病患者及正常人比较存在差异，包括2种细胞 因子上调和1种细胞因子下调的联合表达改变(表1)。另有2种细胞因子与正常人比较存 在差异，包括1种细胞因子上调，1种细胞因子下调(表2) ;4种细胞因子与慢性阻塞性肺病 患者比较存在差异，包括3种细胞因子下调，1种细胞因子上调(表3)。用两组数值的比值 作为最终结果的表现形式。表1多种主要细胞因子在COPD急性加重期患者、COPD患者及正常人血清中的表 达变化
权利要求
1.一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于，包括细胞因子及 其酶标抗体，所述的细胞因子包括人淋巴组织趋化性细胞因子、巨噬细胞源趋化因子和β 细胞素。
2.如权利要求1所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的人淋巴组织趋化性细胞因子为单克隆鼠IgG抗体，巨噬细胞源趋化因子为单克隆鼠 IgG2B抗体，β细胞素为单克隆鼠IgG1抗体。
3.如权利要求1所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的人淋巴组织趋化性细胞因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，巨噬细胞源趋化 因子的酶标抗体为多克隆鸡抗人IgY抗体，β细胞素的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。
4.如权利要求1所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的细胞因子还包括人皮肤T细胞虏获趋化因子、人上皮中性粒细胞活化肽78、人巨噬 细胞移动抑制因子、白介素28Α、白介素四和酪氨酸激酶Axl。
5.如权利要求4所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的人皮肤T细胞虏获趋化因子为单克隆鼠抗体IgG2抗体，人上皮中性粒细胞活化肽78 为单克隆鼠IgGl抗体，人巨噬细胞移动抑制因子为单克隆鼠IgGl抗体，白介素28A为单克 隆鼠IgG2B抗体，白介素四为单克隆鼠IgG2A抗体，酪氨酸激酶Axl为单克隆鼠IgGl抗体。
6.如权利要求4所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的人皮肤T细胞虏获趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗鼠IgG抗体，人上皮中性粒细 胞活化肽78酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人巨噬细胞移动抑制因子的酶标抗体为多 克隆羊抗人IgG抗体，白介素28A的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG，白介素四的酶标抗体为 多克隆羊抗人IgG抗体，酪氨酸激酶Axl的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。
7.如权利要求1所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒还包括PH值为9. 6的碳酸盐缓冲液， PH值为7. 4的磷酸盐缓冲液，血清蛋白稀释液，终止液，四甲基联苯胺底物溶液，正常人血 清和阳性对照血清。
全文摘要
本发明提供了一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于，包括细胞因子的酶标抗体，所述的细胞因子为人淋巴组织趋化性细胞因子(6Ckine)、巨噬细胞源趋化因子(MDC)和β细胞素(BTC)。本发明首次提出包括人淋巴组织趋化性细胞因子(6Ckine)、β细胞素(BTC)和巨噬细胞源趋化因子(MDC)可成为慢性阻塞性肺病急性加重期诊断的主要指标。
文档编号G01N33/573GK102095863SQ20111002822
公开日2011年6月15日 申请日期2011年1月26日 优先权日2011年1月26日
发明者王向东, 白春学, 陈弘 申请人:复旦大学附属中山医院
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