专利名称：一种肝畅制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药复方制剂的质量检测方法，特别涉及一种肝畅制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。
背景技术：
肝脏是人体的代谢中心，为维持生命的重要脏器之一，它的机能状态密切关系人体的健康，肝脏细胞受到破坏，肝脏的功能受到损害，可能引起身体的系列不适应症状。肝炎属中医“肝病”范畴，肝病多由感受时疫湿浊之毒；或饮食不节，损伤脾胃，以致水谷之气运化失常，湿浊内阻，郁蒸化热而使湿热相混，脾胃壅阻，肝气郁结，不能疏泄；或由七情内伤，肝失疏运；或气郁化火，肝络瘀阻；或阴血不足，肝阳偏亢，以及湿热内蕴，寒滞肝脉而成此�。换蛉绕鹊ㄖ庑梗换蚋纹艚幔站蒙寺纾鲎柚停碌ㄖ判共怀ㄖ庑梗� 溢于肌肤为黄疸。临床主要表现右肋胀痛，据按、食欲不振，四肢无力，呕吐、头痛、眩晕、耳鸣，目赤，易怒，全身发黄，肝脏肿大等。据统计，全球携带乙型肝炎表面抗原的人数超过2. 8 亿，我国是肝炎大国，目前我国人群中有8-10%为乙肝病毒携带者，且每年仍有相当数量的新增患者。肝畅胶囊为金诃藏药股份有限公司独家产品，收载于中成药地方标准上升国家标准部分，标准编号WS-10927(ZD-0927)-2002。肝畅胶囊制剂是由如下重量配比的药材制成的松石20. lg、天竺黄20. lg、红花40. 0g、西红花8. 0g、绿绒蒿59. 6g、甘青青兰40. lg、 塞北紫堇40. lg、岩精膏40. lg、丁香20. lg、人工牛黄4. 0g、印度獐牙菜20. lg、波棱瓜子 12. 0g、木香马兜铃12. 0g、石花4. 0g、麝香I. 6g、银朱I. 7g。以上药味，除人工牛黄、人工麝香研细粉外，其余松石等药味粉碎成细粉，过筛，与上述细粉混匀，装入胶囊，制成1000粒， 即得。用于肝胆湿热所引起的胸胁胀痛，食欲不振，急性肝炎见上述证候者。目前该制剂质量标准存质量标准简单、手段单一、产品质量不易控制。原质量标准无含量测定项，现有技术中也未发现对于肝畅胶囊的其他质量检测方法。因此，造成肝畅胶囊制剂产品质量检测不精准，质量标准有待提高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种肝畅制剂的质量检测方法。发明概述本发明对现有的肝畅制剂质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了红花、波棱瓜子的鉴别方法，还新增加了制剂中西红花的有效成分西红花苷-I和西红花苷-II、红花的有效成分羟基红花黄色素A、人工牛黄的有效成分胆红素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量测定方法，进一步确保了产品质量安全、 均一、稳定、质量可控。术语说明肝畅胶囊是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药
肝畅制剂包括肝畅胶囊及用肝畅胶囊原料药配方制备的其他制剂。本发明的技术方案如下一种原料药组成为松石20. I重量份、天竺黄20. I重量份、红花40. O重量份、西红花8. O重量份、绿绒蒿59. 6重量份、甘青青兰40. I重量份、塞北紫堇40. I重量份、岩精膏 40. I重量份、丁香20. I重量份、人工牛黄4. O重量份、印度猜牙菜20. I重量份、波棱瓜子 12. O重量份、木香马5 铃12. O重量份、石花4. O重量份、磨香I. 6重量份、银朱I. 7重量份的肝畅制剂的质量检测方法，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.红花的鉴别取肝畅制剂2g-6g，加体积百分比70% -80%丙酮15_20ml，密塞，振摇20-30分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材O. 5g-l. 5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1-10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为4-12 1-3 1-3的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；B.波棱瓜子的鉴别取肝畅制剂2. 5g-7. 5g，加乙醚20_30ml，加热回流1_1. 5小时，滤过，滤液浓缩至
2-3ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材I. Og,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μ1-10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为5-12 O. 5-1. 5的环己烷-丙酮为展开剂， 展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定A.西红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比O. 1%甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为20-30 70-80 ;检测波长440nm ； 理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500 ；对照品溶液的制备取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末O. 6-lg，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50-60ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;B.红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积
8份数比O. 5%甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28-30 72-75 ;检测波长403nm ； 理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25%甲醇制成每Iml含O. 13-0. 15mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末3_5g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25%甲醇水溶液50-60ml，密塞，称定重量，超声处理40_50min，放冷，再称定重量， 用体积百分比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；C.人工牛黄的含量测定照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比O. 5%醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为 80-83 10-13 10-13检测波长为450nm;理论板数按胆红素峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末4_5g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50-60ml，密塞，称定重量，超声30-40min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;D.印度獐牙菜的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22-25 78-75 ;检测波长237nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ；对照品溶液的制备取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末5_7g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇 25-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;Ε. 丁香的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62-65 38-40 ;检测波长280nm ;理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末O. 5-lg，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;F.麝香的含量测定照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI Ε)测定；色谱条件与系统适用性试验以体积百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17为固定相，涂布浓度为2% ;柱温180°C ;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500 ；对照品溶液的制备取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含O. 25mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末3. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯50-60ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40°C以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至 2ml，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入气相色谱仪，测定， 即得。所述的制剂是指取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括丸剂、微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。优选的,一种原料药组成为松石20. I重量份、天竺黄20. I重量份、红花40. O重量份、西红花8. O重量份、绿绒蒿59. 6重量份、甘青青兰40. I重量份、塞北紫堇40. I重量份、 岩精膏40. I重量份、丁香20. I重量份、人工牛黄4. O重量份、印度獐牙菜20. I重量份、波棱瓜子12. O重量份、木香马5 铃12. O重量份、石花4. O重量份、磨香I. 6重量份、银朱I. 7 重量份肝畅制剂的质量检测方法，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.红花的鉴别取肝畅胶囊4g，加体积百分比80%丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录 VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以体积份数比为8 2 2的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干； 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.波棱瓜子的鉴别取肝畅胶囊5g，加乙醚20ml，加热回流I小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材I. Og,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1-10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以体积份数比为9 I的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定A.西红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比O. I %甲酸水溶液为流动相；流动相的体积份数比为24 76 ;检测波长440nm;理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500 ；对照品溶液的制备取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末O. 6g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;本发明肝畅胶囊含西红花以西红花苷-I (C44H64O24)和西红花苷-II (C38H54O19)的总量计，不得少于O. 7mg/粒；B.红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比O. 5%甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28 72 ;检测波长403nm;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25%甲醇制成每Iml含O. 13mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末3g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25%甲醇水溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用体积百分比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明肝畅胶囊每�：旎ㄒ贼腔旎ɑ粕谹(C27H3tlO15)计，不得少于O. 36mg/ 粒;C.人工牛黄的含量测定照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比O. 5%醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80 10 10检测波长为450nm ;理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末4g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;本发明肝畅胶囊含人工牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于O. 022mg/粒；D.印度獐牙菜的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22 78 ;检测波长237nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ；对照品溶液的制备取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇 25ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;本发明肝畅胶囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于O. 05mg/粒；E. 丁香的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62 38;检测波长280nm;理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末O. 5-lg，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;本发明组合物胶囊含丁香以丁香酚CltlH18O2计，不得少于2mg/粒。F.麝香的含量测定照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI E)测定；色谱条件与系统适用性试验以体积百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17为固定相，涂布浓度为2% ;柱温180°C ;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500 ；对照品溶液的制备取麝香酮对照品适量,加无水乙醇制成每Irnl含O. 25mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末3. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40°C以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入气相色谱仪，测定， 即得；本发明肝畅胶囊含麝香以麝香酮(C16H3tlO)计，不得少于O. 029mg/粒。本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/1。肝畅胶囊原质量标准项下只有西红花、人工牛黄、齐墩果酸的薄层鉴别，无含量测定项，不能有效的检测其他主要成分的质量。本发明对现有的肝畅制剂质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了红花、波棱瓜子的鉴别方法，还新增加了制剂中西红花的有效成分西红花苷-I和西红花苷-II、红花的有效成分羟基红花黄色素A、人工牛黄的有效成分胆红素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量测定方法， 进一步确保了产品质量安全、均一、稳定、质量可控，从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例I鉴别实验肝畅胶囊由青海金诃藏药药业股份有限公司提供。A.红花的鉴别取肝畅胶囊4g，加体积百分比80%丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录 VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开剂体积份数比4-12 1-3 1-3的范围内分别取(10 : 3 : 3)、(8 : 2 : 2)、(8 : I : I)的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；结果分析在体积份数比为4-12 1-3 1-3的醋酸乙酯-甲酸-水展开剂条件下，有较好的展开效果。其中，体积份数比(8:2:2)的醋酸乙酯-甲酸-水的展开剂展开效果最好。B.波棱瓜子的鉴别取肝畅胶囊5g,加乙醚20ml,加热回流I小时,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材I. Og,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1-10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮为展开剂，展开剂体积份数比5-12 O. 5-1. 5的范围内分别取 (12 : 0.5)、(9 : I)、(8 : 1.5)环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；结果分析在体积份数比为(12 : 0.5)、(9 : I)、(8 : 1.5)环己烷-丙酮展开剂条件下，有较好的展开效果。其中，体积份数比(9 I)的醋酸乙酯-甲酸-水的展开剂展开效果最好。实验例2 :含量测定实验A.西红花的含量测定I.仪器、试药和供试样品
仪器1220型安捷伦高效液相色谱仪岛津AuW220D电子天平。对照品西红花苷-I对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号111588-200501 ； 西红花苷-II对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号100001-200504。样品肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号20100414、 20100415,20100416ο2.检测波长的选择取西红花苷-I、西红花苷-II对照品，于190_500nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定440nm为检测波长。3.流动相选择研究发现，分别以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-体积份数比O. I %甲酸水溶液、乙腈-体积份数比O. 1%甲酸水溶液为流动相，乙腈-体积百分比O. 1%甲酸水溶液具有较好的色谱分离效果。其中以乙腈体积份数比O. 1%甲酸水溶液的体积比为24 76为流动相最优。4.系统适用性试验及阴性干扰的考察在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中西红花苷-I、西红花苷-II与其相邻色谱峰的分离度均大于I. 5，且阴性对照无干扰。见附
图1，图2，图3。5.对照品制备取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每 Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得。6.供试品制备6. I提取方法选择本品研细后，取粉末O. 6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声、回流、振摇处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得。表I提取方法考察试验结果
权利要求
1.一种原料药组成为松石20. I重量份、天竺黄20. I重量份、红花40. O重量份、西红花8. O重量份、绿绒蒿59. 6重量份、甘青青兰40. I重量份、塞北紫堇40. I重量份、岩精膏 40. I重量份、丁香20. I重量份、人工牛黄4. O重量份、印度猜牙菜20. I重量份、波棱瓜子 12. O重量份、木香马5 铃12. O重量份、石花4. O重量份、磨香I. 6重量份、银朱I. 7重量份的肝畅制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.红花的鉴别取肝畅制剂2g-6g，加体积百分比70% -80%丙酮15-20ml，密塞，振摇20-30分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材O. 5g-l. 5g，同法制成对照药材溶液; 照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μ1-10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为4-12 1-3 1-3的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.波棱瓜子的鉴别取肝畅制剂2. 5g-7. 5g，加乙醚20-30ml，加热回流1-1. 5小时，滤过，滤液浓缩至 2-3ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材I. Og,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μ 1-10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为5-12 O. 5-1. 5的环己烷-丙酮为展开剂， 展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定A.西红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比O. I %甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为20-30 70-80 ;检测波长440nm ;理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500 ；对照品溶液的制备取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末O. 6-lg，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50-60ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；B.红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比O. 5%甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28-30 72-75 ;检测波长403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25%甲醇制成每Iml含O. 13-0. 15mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末3-5g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25%甲醇水溶液50-60ml，密塞，称定重量，超声处理40_50min，放冷，再称定重量，用体积百分比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;C.人工牛黄的含量测定照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比O. 5%醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80-83 10-13 10-13 检测波长为450nm ;理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末4-5g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50-60ml，密塞，称定重量，超声30-40min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；D.印度獐牙菜的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22-25 78-80 ;检测波长237nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ；对照品溶液的制备取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末5-7g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇 25-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；Ε. 丁香的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62-65 38-40 ;检测波长280nm ;理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末O. 5-lg，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；F.麝香的含量测定照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI E)测定；色谱条件与系统适用性试验以体积百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17为固定相，涂布浓度为2% ;柱温180°C ;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500 ；对照品溶液的制备取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含O. 25mg的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅制剂研细后，取粉末3. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯 50-60ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40°C以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml， 滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求I所述的一种肝畅制剂的质量检测方法，其特征在于所述肝畅制剂是将原料药按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型。
3.如权利要求I或2所述的一种肝畅制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别Α.红花的鉴别取肝畅胶囊4g，加体积百分比80%丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为8 2 2的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.波棱瓜子的鉴别取肝畅胶囊5g，加乙醚20ml，加热回流I小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液； 另取波棱瓜子对照药材I. Og,同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1-10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9 I的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定A.西红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比O. I %甲酸水溶液为流动相；流动相的体积份数比为24 76 ;检测波长440nm;理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500 ；对照品溶液的制备取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末O. 6g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明肝畅胶囊含西红花以西红花苷-I (C44H64O24)和西红花苷-II (C38H54O19)的总量计，不得少于O. 7mg/粒；B.红花的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比O. 5%甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28 72 ;检测波长403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25%甲醇制成每 Iml含O. 13mg的溶液，即得；供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末3g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比 25%甲醇水溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用体积百分比 25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得;本发明肝畅胶囊每粒含红花以羟基红花黄色素A(C27H3tlO15)计，不得少于O. 36mg/粒；C.人工牛黄的含量测定照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比O. 5%醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80 10 10检测波长为450nm ;理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末4g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得； 本发明肝畅胶囊含人工牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于0.022mg/粒；D.印度獐牙菜的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22 78 ;检测波长237nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ；对照品溶液的制备取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇25ml， 密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明肝畅胶囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于0.05mg/粒；E.丁香的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62 38;检测波长280nm;理论板数按丁香酚峰计算应不低于 3000 ；对照品溶液的制备取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末O. 5-lg，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量,摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得； 本发明组合物胶囊含丁香以丁香酚CltlH18O2计，不得少于2mg/粒；F.麝香的含量测定照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI E)测定；色谱条件与系统适用性试验以体积百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17为固定相，涂布浓度为2% ;柱温180°C ;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500 ；对照品溶液的制备取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含O. 25mg的溶液，即得;供试品溶液的制备肝畅胶囊研细后，取粉末3. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯 50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40°C以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过， 取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得;本发明肝畅胶囊含麝香以麝香酮(C16H3tlO)计，不得少于0.029mg/粒。
全文摘要
本发明公开了一种治疗肝病的药物组合物的质量检测方法，属于医药技术领域。本发明对现有的肝畅胶囊的质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了红花、波棱瓜子的鉴别方法，还新增加了制剂中西红花的有效成分西红花苷-I和西红花苷-II、红花的有效成分羟基红花黄色素A、人工牛黄的有效成分胆红素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量测定方法，进一步确保了产品质量安全、均一、稳定、质量可控。从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。
文档编号G01N30/90GK102590433SQ20121004755
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月28日 优先权日2012年2月28日
发明者孙泰俊, 杨敬燕, 江玉娟, 马宏伟, 魏永义 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司
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