专利名称：一套用于对组织切片进行免疫组织化学染色及保存的载玻片的制作方法
技术领域：
本发明涉及医学生物实验装置，尤其涉及一套用于对组织切片进行免疫组织化学染色的载玻片。
背景技术：
在医学实验中，利用抗原与抗体特异性结合的原理，采用不同抗体对组织进行免疫化学染色，是检测机体在生理或病理状态下功能变化最常用的方法之一。在组织切片的免疫染色过程中，通常采用贴片法和漂片法对其进行染色。采用贴片法染色首先是将石蜡组织或冰冻组织进行切片后，粘贴于载玻片上，然后按照免疫组织化学染色的相关步骤检测。目前该检测方法通常存在以下问题:1、检测过程中对组织进行反复冲洗，容易造成组织切片脱落；2、由于抗体一般比较昂贵，因此加入一抗和二抗的量有限。在实验添加抗体的操作过程中，由于载玻片或组织表面轻微的倾斜都可能导致抗体不能有效和组织接触，影响抗体与抗原的特异性结合，从而导致实验检测的失败。3、目前在组织染色结束后，通常采用中性树脂、石蜡油或甘油对组织进行封片，以保存实验的阳性结果，尤其是荧光阳性结果的保存，通常都采用甘油对组织进行封片，但该类封片剂容易造成盖玻片的移位而不能很好的固定组织及保存染色结果。而漂片法染色则是将组织切片放置于一个容量装置中完成染色的所有步骤。该染色方法可以避免组织切片脱落以及抗体与组织有效接触等问题，但是该方法所需抗体的量较大，且在染色完成后需要将组织切片从容器中转移到载波片上进行封片处理，方可观察染色结果。然而在组织转移过程中可导致组织破损和折叠，影响实验结果的观察。因此理想的用于免疫组织化学检测的载玻片装置应该避免上述两种染色方法存在的突出问题。目前通过多聚赖氨酸对载玻片进行处理后，可在一定程度上减少冲洗过程中组织切片的脱落，但对抗体的溢出及盖玻片的移位尚无有效的解决方法。然而多聚赖氨酸是一种蛋白质，在反应过程中可能黏附大量的抗体而影响抗体与组织切片中抗原的结合。如中国专利申请:特别用于荧光显微镜的载玻片(专利号03101482.8)、一种用于微生物检测的微生物载玻片(申请号200610163269.7)分别提出了利用具有吸收荧光特性或设有荧光光线的抗发射层来实现对荧光结果的保护作用以及通过对载玻片上特定区域进行颜色标识和面积限制以便于在显微镜下对微生物进行直接定位和形状及数量的计算。虽然上述方法在解决荧光衰减及组织定位方面有一定的作用，但是要解决目前在组织免疫荧光染色过程中所存在的组织脱片、抗体溢出及盖玻片滑脱等问题，仍需要对载玻片进行特殊的设计与处理。其次，中国专利:通用型病理组织细胞化学染色载玻片(申请号201020243434.1)，该实用新型专利较好的解决了免疫组化染色过程中切片脱落以及组织抗原与抗体结合的有效性问题，但该装置在染色前需对切片进行多聚赖氨酸的预处理，同时需要将组织进行转移后封片方可进行结果观察。因此该专利未能避免组织切片转移过程中可能出现破损与折叠的缺陷，同时也不能避免甘油等封片剂封片后所引起的盖玻片滑脱和移位等问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有载玻片在对组织进行免疫化学染色过程中容易造成切片脱落，抗体溢出、盖玻片移位、组织转移受损等问题，提出一套可以用于石蜡或冰冻组织免疫化学染色及有效保存的载玻片，且通过与之匹配的封片单元可对组织细胞的大小进行初步的测量。该载玻片结构简单，成本低廉，能较好的保证组织切片和盖玻片的稳定性以及抗体与组织接触反应的有效性。本发明解决上述技术问题采用的技术方案是:一套用于对组织切片进行免疫化学染色及保存的载玻片，其包括透明玻璃材质的载物单元和封片单元。所述载物单元承载面上具有600um-800um深度、不同形状的凹槽，凹槽内表面光滑，每个凹槽对应有一个封片单元，封片单元厚度为200 um。封片单元上以其中心为基点，分布有纵横垂直交叉的直线，划分出边长10 um的多个方格,封片单兀的边缘设置有一圈密封圈。在对组织进行染色后，将封片单元盖在载物单元对应的凹槽中，通过封片剂将受检测的组织固定在凹槽内，并通过密封圈密封，实现对组织切片的固定与封片保存。染色过程中，载物单元凹槽形状的选择根据受检组织的形状、大小决定，可以为圆形、椭圆形、长方形或正方形。载物单元的左侧进行磨砂处理，形成对组织切片进行标记的标记部。本套载玻片在载物单元上制作不同形状的凹槽是用于放置需要检测的组织切片。采用的封片单元在检测结束后可以与载物单元和受检组织通过滴加封片剂后融合为一体，便于实验结果的采集与保存。而且由于封片单元形状及大小与载物单元相匹配，封片后通过周围的密封圈可使其牢固的嵌在凹槽内，从而对组织起良好的固定和防止空气氧化等作用。同时该封片单元不会凸出在载物单元上，不会被碰歪或碰掉，可以保证对组织切片的良好保存。另外，由于该封片单元上具有刻度方格，因此在显微镜下观察时，可初步测量组织细胞的大小与面积。可见，本发明设计的载玻片，将载物单元和封片单元一体化，能较好的保证组织免疫化学染色过程中组织切片和封片的稳定性以及抗体与组织接触反应的有效性，并有效的避免了组织脱落，抗体溢出、封片单元移位以及组织转移受损等问题。同时还可对组织细胞的大小和面积进行测量。该套载玻片除用于免疫组织化学检测外，还可用于原位杂交及其相关的生物医学检测。
图1是免疫组化染色特制载物单元的平面视图；图2是载物单元和封片单元在使用中的操作过程的示意图。具体实施方法下面结合附图和具体实例对本发明进行详细说明。如图1和图2所示，本载玻片由载物单元I和封片单元2构成。载物单元I为厚度1.2mm的玻璃，在其承载面上具有不同深度、不同形状(如圆形、椭圆形、长方形和正方形等)凹槽11，凹槽深度600um-800um，内表面光滑，用于容纳组织切片，每个凹槽都对应有一片形状与深度可与之匹配的封片单元2，封片单元厚度为200 um。封片单元上以其中心为基点，分布有纵横垂直交叉的直线，划分出边长10 um的多个方格21,封片单兀的边缘还设置有一圈密封圈22。载物单元I的承载面的左侧还有磨砂处理的标记部12。参见图2，在组织免疫组化检测过程中，载物单元的凹槽内表面光滑，不用涂具多聚赖氨酸，组织切片放置于凹槽内，在整个染色过程中漂洗组织的缓冲液以及添加的各种试剂均滴加于凹槽内。在免疫组化染色结束后，首先吸出多余液体，并将组织切片3晾干，然后在载物单元的凹槽内滴加封片剂4，最后将与凹槽11匹配的封片单元2盖到凹槽内，使载物单元1、组织切片3与封片单元2构成一个整体，便于实验结果的保存与观察、采集。可见本发明提供了一种结构简单，成本低廉，能较好的保证组织切片和封片单元的稳定性以及抗体与组织接触反应有效性的特制载玻片。该装置实验操作简便，可较好地避免目前组织免疫组化染色过程中存在的突出问题，而且利用封片单元上的刻度可对染色组织的大小和面积进行初步的计算与分析。
权利要求
1.套用于对组织切片进行免疫化学染色及保存的载玻片，包括玻璃材质的载物单元和封片单元；其特征在于，所述载物单元的承载面上具有不同深度、形状的用于容纳组织切片进行染色的凹槽，凹槽内表面光滑，每个凹槽对应有一块封片单元，封片单元与所述凹槽的形状相匹配，厚度为200 um，封片单元上以其中心为基点，分布有纵横垂直交叉的直线，划分出边长10 um的多个方格，封片单元的边缘设置有一圈密封圈；在对组织进行染色后，将封片单元盖在载物单元对应的凹槽中，通过封片剂将受检测的组织固定在凹槽内，并通过密封圈密封，实现对组织切片的固定与封片保存。
2.根据权利要求1所述的用于对组织切片进行免疫化学染色及保存的载玻片，其特征在于，所述凹槽为圆形、椭圆形、长方形或正方形。
3.根据权利要求1或2所述的用于对组织切片进行免疫化学染色及保存的载玻片，其特征在于，所述载物片的左侧有磨砂处理的标记部。
全文摘要
一套用于对组织切片进行免疫化学染色及保存的载玻片，其载物单元的承载面上具有不同深度、形状的用于容纳组织切片的凹槽，凹槽内表面光滑，每个凹槽对应有一块封片单元，封片单元片与所述凹槽的形状相匹配，封片单元上以其中心为基点，分布有纵横垂直交叉的直线，形成边长为10 um的每个方格，且封片单元的边缘设有密封圈。该套载玻片有效避免了现有免疫组织化学检测过程中容易造成组织切片脱落，抗体溢出、盖玻片移位以及组织转移受损等问题，且结构简单，成本低廉，能较好的保证组织切片和盖玻片的稳定性以及抗体与组织接触反应的有效性，同时通过封片单元上的刻度线可对受检测组织的大小和面积进行测算。
文档编号G01N1/31GK103091826SQ201210562179
公开日2013年5月8日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者刘媛, 叶有义, 谭波涛, 王莉, 伍亚民, 王正国 申请人:中国人民解放军第三军医大学第三附属医院
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