专利名称：独一味贴膏剂的含量测定方法
技术领域：
本发明提供了一种检测方法，其为一种中药成分的含量测定方法，尤其是 指一种中药成分利用高效液相进行含量测定的方法。
背景技术：
独一味巴布膏的处方的主要成分原料为独一味药材，中国药典2005版收载 了独一味药材及成方制剂独一味胶囊，独一味胶囊为口服制剂，提取工艺为水 提前处理，而独一味巴布膏为水提醇沉等前处理；本品为外用巴布膏，与口服 制剂独一味胶囊在提取工艺、制剂成型工艺、药理、用法用量等多方面具有区 另U，现有技术中无法提供能够准确检测含有独一味提取物的贴膏剂的方法，因 此不能提供出质量稳定，疗效一致的产品。发明内容目前在含有独一味活性成分的中药制剂方面，配方和质量监控方法比较成熟 的一般为口服的独一味制剂，尤其是胶囊剂，而胶囊剂与外用剂型的组分、辅 料和制备工艺均有很大差异，针对适用于胶囊剂的质量控制方法不适用于外用 剂型，尤其不适用于贴膏剂的这种情况，本发明的目的是提供一种适合含有独 一味活性成分的外用剂型，尤其是贴膏剂，例如巴布膏的质量控制方法，使用 该方法以及该方法中的技术指标，可以很好的监控独一味贴膏剂的质量，使中药外用剂型质量稳定，疗效统一，能更好地服务社会。本发明的目的是开发一种含有独一味活性成分的贴膏剂的质量控制方法，该 方法简便、高效、适合科研和工业化生产的需要。本发明提供了一种含有独一味提取物的贴膏剂的质量控制方法，该含有独一 味提取物的贴膏剂也可称为独一味贴膏剂，该质量控制方法包括(1) .采用高效液相色谱法进行测定；色谱条件为采用反相色谱柱，以醇-酸溶液为流动相，并且采用紫外检测器，检测波长为280-400nm;(2) .对照品溶液的制备，称取木犀草素对照品，加甲醇制成对照品溶液；(3) .供试品溶液的制备，取独一味贴膏剂加入l-5mol/L盐酸甲醇溶液，回 流提�。〕觯爬洌斯芰咳⌒艘海蛹状枷∈停吹茫黄渲校� 述的独一味贴膏剂的每100ci^含膏量应介于12.7 14.8g;(4) .进行测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。(5) .计算，得到木犀草素的含量；即，每1片独一味贴膏剂中独一味的含 量以木犀草素(C15H1C)06)计，不得少于6.0mg。其中，上述步骤(5)的计算方法无需具体明示，其为本领域技术人员所公 知，是通过峰面积于溶液浓度的比例进行换算得到的，在此不再赘述。所述的步骤(1)的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲 醇-磷酸溶液为流动相，检测波长为280-400nm，色谱柱的理论板数按木犀草素 峰计算不低于1500。流动相优选为甲醇和磷酸的混合溶液，优选该甲醇与0.1-1%磷酸的混合溶 液溶液，更优选甲醇与0.4%磷酸的混合溶液；二者的体积比一般为1: 5 5: 1，优选1: 2 2: 1，最优选的流动相是以50: 50的体积比例配制的甲醇-0.4% 磷酸溶液，即，对于独一味贴膏剂而言，对其进行重量控制的方法， 一般采用HPLC进行含量测定，甲醇-磷酸溶液(50: 50)是最优选的流动相。 检测波长一般选择310-375nm。所述步骤(2)中的对照品溶液为每lml含5-50ug木犀草素的溶液，优选 15-25ug。所述步骤(3)中大约1.5g供试品，于100ml锥形瓶中加入l-5mol/L盐酸 甲醇溶液25ml，回流提取90分钟，取出，放冷，以提取溶液补足减失的重量， 滤过，再将滤液用甲醇稀释至2倍量，即得供试品溶液。为了得到的含测效果更精确，上述盐酸甲醇溶液优选为2.5mol/L。 在本发明的优选实施例中，所述的独一味贴膏剂为含有独一味提取物的巴布 膏，其质量控制方法包括(1) .采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为，用十八垸基硅烷键合硅 胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50: 50)为流动相，检测波长为350nm， 色谱柱的理论板数按木犀草素峰计算不低于1500;(2) .对照品溶液的制备，精密称取木犀草素对照品适量，加甲醇制成每lml 含20ug的溶液，摇匀，即得；(3) .供试品溶液的制备，取独一味贴膏剂，例如巴布膏，剪成小块，除去 盖衬，取约1.5g，精密称定于100ml锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸甲醇溶液 25ml，称定重量，回流提取卯分钟，取出，放冷，以提取溶液补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 即得；(4).进行测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10nl，注入液相 色谱仪，测定，即得。本品每1片含独一味以木犀草素(C15H1()06)计，不得少于6.0mg。 鉴于本巴布膏基质中多为亲水性成分，独一味中主要成分为水溶性的黄酮 类成分。参考药典和相关文献，采用高效液相色谱法(HPLC法)测定其中水解 产物木犀草素的含量作为控制手段。为了得到较佳的上述独一味贴膏剂的质量 控制方法，本发明进行了大量的筛选实验，根据实验结果得到优选工艺条件。 色谱条件的选择1. 检测波长的选择对木犀草素对照品溶液进行吸收波长扫描，结果发现，木犀草素在 280-400nm出有吸收，其中，在350nm波长处有最大吸收，因此，本发明的方法 选择280-400nm为检测波长，最优选350nm。2. 流动相的选择试验参曾选用流动相①甲醇-0.4。/。磷酸溶液(50: 50); 乙腈-0.4%磷酸溶 液(30: 70);③甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8) (50: 50)，等等，对独一味巴布 膏中的木犀草素进行含量测定，结果均得到样品中木犀草素峰基线分离的对称 色谱峰，方法学考察以流动相甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相检测效果比较好，其 中甲醇-0.4%磷酸溶液(50: 50)的流动相为最优选。3. 色谱柱的考察初歩选择反相色谱柱，筛选试验参曾选用Thermo 0DS-2 HYPERSIL (250mmx4.6mm， 5um)、 Phenomenex Luna Ci8 (150mmx4.6mm， 5um)、 Agilent Eclipse XDB — C1S (150mmx4.6薩，5pm)三个品牌的色谱柱对独一味巴布膏中的木犀草素进行含量测定，均得到样品中木犀草素峰基线分离的对称色谱峰，分离度大于.1.5，理论塔板数按木犀草素峰计算大于7000，故该方 法适用范围较广。方法学考察以Phenomenex LunaC18 (150mmx4.6mm， 5um) 为分析柱。4.供试品溶液的制备方法的选择本发明的试验沿用酸水解制备样品溶液的方法，对水解酸浓度、提取溶媒、 提取方法、提取时间等因素做了考察，试验方法和结果如下。4.1水解酸浓度选择取独一味贴膏剂(例如，批号070401的巴布膏)，剪 成小块，除去盖衬，取约1.5g，精密称定于100ml锥形瓶中，分别精密加入1.5moI/L 盐酸甲醇溶液、2.0mol/L盐酸甲醇溶液、2.5mol/L盐酸甲醇溶液、3.0mol/L盐酸 甲醇溶液、3.5mol/L盐酸甲醇溶液各25ml，称定重量，加热回流90分钟，取出， 放冷，用各自水解溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置 10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。按上述色谱条件测定结果如下。表l水解酸浓度考察试验结果水解酸浓度1.5mol/L盐酸甲醇2.5mol/L盐酸甲醇3.5mol/L盐酸甲醇木犀草素含量(mg/g)0.47420.61670.5834水解酸浓度2.0mol/L盐酸甲醇2.5mol/L盐酸甲醇3.0mol/L盐酸甲醇木犀草素含量(mg/g)0.62680.62580.6024由上可见以2.0mol/L盐酸甲醇和2.5mol/L盐酸甲醇溶液为水解酸浓度时， 木犀草素的提取效率更高，参考文献资料，最优选水解介质为2.5mol/L盐酸甲 醇溶液。4.2提取溶媒选择取独一味贴膏剂(例如，批号070401的巴布膏)，剪 成小块，除去盖衬，取约1.5g，精密称定于100ml锥形瓶中，分别精密加入2.5mol/L盐酸50%甲醇溶液、2.5mol/L盐酸甲醇溶液、2.5mol/L盐酸乙醇溶液各25ml，称 定重量，加热回流90分钟，取出，放冷，用各自提取溶液补足减失的重量，摇 匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即 得。按上述色谱条件测定，测定结果如下。表2提取溶媒考察试验结果提取溶媒2.5mol/L盐酸 50%甲醇溶液2.5mol/L盐酸 甲醇溶液2.5tnol/L盐酸 乙醇溶液木犀草素含量(mg/g)0.42420.63340.6223由上可见，以2.5mol/L盐酸甲醇溶液提�。鞠菟氐暮孔罡撸适笛� 选择2.5mol/L盐酸甲醇溶液为提取溶液。4.3提取方法选择取独一味贴膏剂(例如，批号070401的巴布膏)，剪成 小块，除去盖衬，取约1.5g，精密称定于100ml锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐 酸甲醇溶液25ml，称定重量，分别进行①浸渍过夜再超声提取30miri，②浸渍过 夜再回流提取30min，③加热回流120分钟，取出，放冷，以提取溶液补足减失 的重量，摇匀，滤过，精密量�、�、②的续滤液5ml，置圆底烧瓶中，于水浴上 水解30min，取出，放冷，转移至10mi量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 精密量�、鄣男艘�5ml，置10m遣瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。按 上述色谱条件测定，测定结果如下。表3提取方法考察试验结果提取方法浸渍过夜再超声30min浸渍过夜再回流30min回流120min木犀草素含量(mg/g)0.64870.65030.6436RSD (0/0)0.54由上可见，三种提取方法对样品中木犀草素的含量影响几乎无差别，故本 发明选择直接回流。4.4提取时间选择取独一味贴膏剂(例如，批号070401的巴布膏)，剪成 小块，除去盖衬，取约1.5g，精密称定于100ml锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐 酸甲醇溶液25ml，称定重量，分别进行①回流提取60min，②回流提取90min， ③回流提取120min，取出，放冷，以提取溶液补足减失的重量，摇匀，滤过， 精密量取续滤液5ml，置10m慮瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。按上述 色谱条件测定，测定结果如下。表4提取时间考察试验结果提取时间(min)6090120木犀草素含量(mgZg)0.61020.64150.6289RSD (%)2.51由上可见，提取不同时间对样品中木犀草素的含量影响几乎无差别，实验选择直接回流卯min。综上所述，供试品溶液的制备方法最优选为取独一味巴布膏，剪成小块， 除去盖衬，取约1.5g,精密称定于100ml锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸甲醇 溶液25ml，称定重量，回流提取90min，取出，放冷，以提取溶液补足减失的重 量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇 匀，即得。本发明中每贴(片)独一味巴布剂的规格一般为长6.5 10.0cm，宽10.0 15.0cm，面积约为60 120cm2，例如7.5cmX12cm，面积为90 cm2，理论含膏 量约为10-15克，每l片(贴)巴布剂含独一味以木犀草素(C15H1Q06)计，不得 少于6.0mg。本发明的质量控制方法快速便捷，重复性良好，适合实验室的小样检测以 及工业化大生产的质量检测。
具体实施方式
以下结合实施例详细说明本发明，但不限定本发明的实施范围。实施例一.l.仪器与试药仪器Agilent 1100高效液相色谱仪及配套工作站； Sartorius CP225D电子天平；木犀草素对照品批号111520—200504,供含量测定用，购自中检所； 试齐U:色谱用甲醇为色谱纯，(美国Fisher化学试剂公司)，水为重蒸馏水(自 制)；其它试剂均为分析纯。 2 .色谱条件 2.1检测波长为350nm。 2.2流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(50: 50)。 2.3色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。 色谱条件与系统适用性试验:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0，4°/。磷酸溶液(50: 50)为流动相。检测波长为350nm，理论板数按木犀草素峰计算不低于1500。对照品溶液的制备精密称取木犀草素对照品适量，加甲醇制成每lml含 20ug的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取独一味巴布膏，剪成小块，除去盖衬，取约1.5g,精 密称定于100ml锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，回流提取90分钟，取出，放冷，以提取溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪， 测定，即得。其中，每贴(片)巴布剂理论含膏量约为10—15克，每l片(贴)含独一味 以木犀草素(C15H1()06)计，不得少于6.0mg。
权利要求
1.一种独一味贴膏剂的含量测定方法，该独一味贴膏剂为含有独一味提取物的贴膏剂，该方法包括(1)采用高效液相色谱法进行测定；色谱条件为采用反相色谱柱，以醇-酸溶液为流动相，并且采用紫外检测器，检测波长为280-400nm；(2)对照品溶液的制备，称取木犀草素对照品，加甲醇制成对照品溶液；(3)供试品溶液的制备，取含膏量为12.7～14.8g/100cm2独一味贴膏剂加入1-5mol/L盐酸甲醇溶液，回流提�。〕觯爬洌斯芰咳⌒艘海蛹状枷∈停�(4)进行测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；(5)计算，得到的具体木犀草素的含量。
2. 权利要求1所述的含量测定方法，该方法中步骤(1)所述的反相色谱柱 用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-磷酸溶液为流动相，检测波长为 280-400nm。
3. 权利要求1所述的含量测定方法，该方法中步骤(1)所述的流动相为体 积比l: 5 5: 1的甲醇与0.1-1%磷酸的混合溶液溶液。
4. 权利要求3所述的含量测定方法，其中所述的流动相为50: 50的甲醇 -0.4%磷酸溶液。
5. 权利要求1所述的含量测定方法，该方法中步骤(1)所述的检测波长为 310-375nm。
6. 权利要求1所述的含量测定方法，该方法中步骤(2)所述的对照品溶液 为每lml含5-50ug木犀草素的溶液。
7. 权利要求1所述的含量测定方法，该方法中步骤(3)中每1.5g供试品于100ml锥形瓶中加入l-5mol/L盐酸甲醇溶液25ml，回流提取30—360分钟，取 出，放冷，以提取溶液补足减失的重量，滤过，再将滤液用甲醇稀释至2倍量， 即得供试品溶液。
8. 权利要求7所述的含量测定方法，其中，所述的盐酸甲醇溶液为2.5mol/L。
9. 权利要求1所述的含量测定方法，其中包括-(1) 采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为，用十八垸基硅垸键合硅 胶为填充剂；以50: 50的甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相，检测波长为350nm， 色谱柱的理论板数按木犀草素峰计算不低于1500;(2) 对照品溶液的制备，称取木犀草素对照品适量，加甲醇制成每lml含 20ug的溶液，摇匀，即得；(3) 供试品溶液的制备，取独一味贴膏剂，剪成小块，除去盖衬，取1.5g， 精密称定于100ml锥形瓶中，加入2.5mol/L盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，回流 提取卯分钟，取出，放冷，以提取溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量 取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；(4) 进行测定，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各lOpl，注入液相色谱 仪，测定，即得。
全文摘要
本发明提供了一种独一味贴膏剂的含量测定方法，包括采用高效液相色谱法进行测定；色谱条件为采用反相色谱柱，以醇-酸溶液为流动相，并且采用紫外检测器，检测波长为280-400nm；对照品溶液的制备，称取木犀草素对照品，加甲醇制成对照品溶液；供试品溶液的制备，取独一味贴膏剂加入1-5mol/L盐酸甲醇溶液，回流提�。〕觯爬洌斯芰咳⌒艘海蛹状枷∈停吹茫唤胁舛ǎ直鹁芪《哉掌啡芤河牍┦云啡芤海⑷胍合嗌滓牵舛ā�
文档编号G01N30/00GK101259163SQ200810090218
公开日2008年9月10日 申请日期2008年4月1日 优先权日2008年4月1日
发明者廖立东, 熊正涛, 达晓玲, 阙文彬 申请人:四川贝力克生物技术有限责任公司
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