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专利名称：一种银染试剂及其染色方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种银染试剂及其染色方法。
背景技术：
聚丙烯酰胺凝胶电泳，是蛋白质研究中常用的蛋白检测技术之一。蛋白染色，是检测电泳胶上蛋白条带的常规技术，是将蛋白可视化的途径。银染色法是当今蛋白质凝胶电泳最敏感的测定方法之一，但步骤繁琐，所需配制试剂较多，且费用较高。蛋白采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后，一般采用考马斯亮蓝染色。这种染色方法敏感度低，样品中一些微量的蛋白质组分往往不能显示，比较耗时，准确性也偏低。为了提高检测蛋白质的灵敏度，也可采用银染的方法，但目前已有的银染方法步骤繁琐，且耗时长。

发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于蛋白银染的试剂。本发明提供的试剂，包括染色液和显色液；在上述试剂中的所述染色液的溶质由下述配比的物质组成乙醇硝酸硝酸银 =25ml Iml 0. 2g ；在上述试剂中的所述显色液的溶质由下述配比的物质组成碳酸钠甲醛= 3g 0.2mlo在上述试剂中，所述染色液和所述显色液的溶剂均为水。在上述试剂中，所述染色液和所述显色液均为独立包装。在上述试剂中，所述染色液由染色液溶质和溶剂组成；所述显色液由显色液溶质和溶剂组成；在上述试剂中，所述染色液中各溶质的浓度如下所述乙醇在所述染色液中的浓度为25% (体积百分含量)，所述硝酸在所述染色液中的浓度为(体积百分含量)，所述硝酸银在所述染色液中的浓度为0.2% (质量百分含量)；在上述试剂中，所述显色液中各溶质的浓度如下所述碳酸钠在所述显色液中的浓度为3% (质量百分含量)，所述甲醛在所述显色液中的浓度为0.2% (体积百分含量)。在上述试剂中，所述蛋白为未预染蛋白Marker (Unstained Protein Molecular weight Marker)；购自 Fermentas，产品货号#SM0431，产品目录号Lot00031819。在上述试剂中，在本发明的实施例中所述水均为去离子水；在上述试剂中，所述试剂由染色液和显色液组成。上述的试剂在待测蛋白银染中的应用也是本发明保护的范围，在本发明的实施例中，所述待测蛋白具体为未预染蛋白Marker(Unstained Protein Molecular weight Marker)；购自 Fermentas，产品货号#SM0431，产品目录号Lot00031819。。本发明的另一个目的是提供一种待测蛋白银染的方法，包括如下步骤
1)将含有待测蛋白的凝胶置于上述的试剂中的所述染色液中染色得到染色后凝胶；2)将步骤1)得到的染色后凝胶用水洗涤得到洗涤后凝胶；3)将步骤2、得到的洗涤后凝胶置于上述的试剂中的所述显色液中显色，即得到银染后蛋白凝胶。在上述方法中，在步骤幻中显色后，还包括将显色后的凝胶置于水中终止显色的步骤。在本发明的实施例中，水为去离子水。在上述方法中，步骤1)中，所述染色的温度为25°C 48°C，所述染色时间为 5min-10min ；在本发明的实施例具体为IOmin ；在上述方法中，步骤2)中，所述洗涤时间为anin-5min，在本发明的实施例具体为 5min,在上述方法中，步骤3)中，所述显色的时间为anin-5min，在本发明的实施例具体为5min，所述显色的温度为25°C -28°C ；所述步骤1)和步骤幻均在摇床上进行，摇床的转速为50-150转/分，本发明的实施例是均在100转/分的摇床上进行试验。在上述方法中，所述含有待测蛋白的凝胶是将待测蛋白经SDS聚丙烯凝胶电泳得到的凝胶；IjfiiitllJS S5S Marker (Unstained Protein Molecular weight Marker)；购自 Fermentas，产品货号#SM0431，产品目录号Lot00031819。本发明的实验证明，本发明采用新的银染方法及特定的银染试剂，操作简单，大大提高了灵敏度高，实现聚丙烯酰胺凝胶电泳后，对蛋白的快速，高效，精准的检测，大大缩短检测所需时间，整个银染检测过程仅需20min (或者小于20min)；而且检测所需样品量大大减少，最低可以检测到纳克级(0. 5-4ng)蛋白，且结果灵敏，可信度高。


图1为银染方法染色结果图2为考染的染色结果
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、蛋白的银染染色一、蛋白电泳电泳所采用设备仪器电泳仪Bio-Rad mini protean III垂直板电泳系统USDS-PAGE电泳胶的配制分离胶浓度为15%，浓缩胶浓度为4. 5%，凝胶厚度为 0. 75mm。表1SDS-PAGE电泳胶的配制
权利要求
1.一种用于蛋白银染的试剂，包括染色液和显色液；所述染色液的溶质由下述配比的物质组成乙醇硝酸硝酸银= 25ml Iml 0. 2g ；所述显色液的溶质由下述配比的物质组成碳酸钠甲醛=3g 0.2ml。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于 所述染色液和所述显色液的溶剂均为水。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于 所述染色液和所述显色液为均独立包装。
4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂，其特征在于 所述染色液由染色液溶质和溶剂组成；所述显色液由显色液溶质和溶剂组成；所述染色液中各溶质的浓度如下所述乙醇在所述染色液中的浓度为25% (体积百分含量)，所述硝酸在所述染色液中的浓度为(体积百分含量)，所述硝酸银在所述染色液中的浓度为0.2% (质量百分含量)；所述显色液中各溶质的浓度如下所述碳酸钠在所述显色液中的浓度为3% (质量百分含量)，所述甲醛在所述显色液中的浓度为0. 2% (体积百分含量)。
5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂，其特征在于 所述水为去离子水；所述试剂由染色液和显色液组成。
6.权利要求1-5任一所述的试剂在待测蛋白银染中的应用。
7.一种待测蛋白银染的方法，包括如下步骤1)将含有待测蛋白的凝胶置于权利要求1-5任一所述的试剂中的所述染色液中染色得到染色后凝胶；2)将步骤1)得到的染色后凝胶用水洗涤得到洗涤后凝胶；3)将步骤2、得到的洗涤后凝胶置于权利要求1-5任一所述的试剂中的所述显色液中显色，即得到银染后蛋白凝胶。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于在步骤幻中的显色后，还包括将显色后的凝胶置于水中终止显色的步骤。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于步骤1)中，所述染色的温度为25V 48°C，所述染色时间为5min-10min ； 步骤幻中，所述洗涤时间为anin-5min，步骤3)中，所述显色的时间为anin-5min，所述显色的温度为25°C -28V。
10.根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于所述含有待测蛋白的凝胶是将待测蛋白经SDS聚丙烯凝胶电泳得到的凝胶。
全文摘要
本发明公开了一种银染试剂及其染色方法。本发明提供了一种用于蛋白银染的试剂。本发明提供的试剂，包括染色液和显色液；在上述试剂中的所述染色液的溶质由下述配比的物质组成乙醇∶硝酸∶硝酸银＝25ml∶1ml∶0.2g；在上述试剂中的所述显色液为由下述配比的物质组成碳酸钠∶甲醛＝3g∶0.2ml。本发明的实验证明，本发明采用新的银染方法及特定的银染试剂，操作简单，大大提高了灵敏度高，实现聚丙烯酰胺凝胶电泳后，对蛋白的快速，高效，精准的检测。
文档编号G01N1/30GK102507289SQ20111036211
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月15日 优先权日2011年11月15日
发明者班丽萍, 石旺鹏, 赵立静 申请人:中国农业大学