专利名称：蜂蜜中大米糖浆掺假鉴别快速检测方法
技术领域：
本发明涉及一种蜂蜜是否掺有大米糖浆的鉴别检测方法。
背景技术：
现行的强制性蜂蜜国家标准GB 14963-2011和GB18796-2005中对蜂蜜的定义为 蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。尽管标准中明确规定蜂蜜是天然物质，不允许人为添加和去除任何物质，但是蜂蜜掺假问题却一直都存在，而且一直没有受到普通消费者的高度警惕。一方面，掺假蜂蜜本身对人体�：Τ潭炔患捌渌恍┎艏偈称罚涣硗庖环矫妫觳夥椒ǖ闹秃螅贾录俜涿酆嵝蟹豪�。在蜂蜜中掺入大米糖浆是蜂产品行业中普遍存在的现象，尽管和蜂蜜相关的国家、行业和地方检测标准多达60个，国内外蜂蜜相关检测科技文献近千篇，但95%的标准和科技文献均针对蜂蜜中抗生素残留和农药残留等安全指标。随着掺假技术的不断更新，目前的蜂蜜主要造假手段为掺入大米糖浆，现行的检测蜂蜜掺假的方法已经无法准确和有效鉴别出大米糖浆这种普遍存在的掺假行为，其结果就是导致现在国内市场上掺假蜂蜜泛滥成灾，而且大量掺假蜂蜜流入国际市场。一旦爆发，将又一次对中国的蜂蜜行业乃至中国食品安全产生巨大冲击和影响。
发明内容
本发明的目的在于针对目前造假蜂蜜中的大米糖浆，找到一种灵敏度高、针对性强、操作简单、检测时间短的蜂蜜中大米糖浆的快速鉴别检测方法。为了实现上述发明目的，本发明公开了一种蜂蜜中大米糖浆的快速检测方法，包括样品前处理、液相分离、质谱检测三个步骤。该方法是以质荷比为311. 0742m/z的离子峰为大米糖浆的特征检测峰的高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱检测法。通过差异化分析法比较不同蜜源的纯天然蜂蜜和掺假用途的大米糖浆，找出大米糖浆内源性特征标识物。 并在此基础上，对最终予以确认的内源性特征标识物进行稳定性实验，确定在高分辨飞行时间质谱仪中质荷比为311. 0742m/z的离子峰为大米糖浆的特征检测峰。检测时，首先将蜂蜜样品中水溶性糖类等杂质与目标分析物有效分离和切换去除，防止其进入质谱仪产生基质效应，影响定性和定量准确性。本发明公开了一种优选的液相分离条件为色谱柱选用C18色谱柱；柱温为35 �。涣鞫辔�.乙腈一 B. 0.1 %甲酸，流速为0. 2 mL/min ；采用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，O 4mi η, A 5
B 9 5%;4 5mi n，A:5% 9 O %> B 9 5% 1 0%;5 1 3mi η , A 9 O B 1 O % ； 1 3 1 5mi η , A 9 0% 5%、Β:1 0% 9 5 % ； 1 5 20min，A:5%、B:95%。在这种液相分离条件下，做到了蜂蜜中大米糖浆掺假鉴别的高通量筛选和确证一体化。最后，本发明公开了所述的质谱检测采用电喷雾离子源；毛细管电压3. 5 kV ；干燥气温度325 °C;干燥气流量(氮气):5 L/min ；鞘气温度400 °C ；鞘气流量(氮气)12 L/ min;雾化器压力45 psig ；正离子全扫描。利用飞行时间质谱的高分辨率特性，最大程度的避免了假阳性的产生。
图1为大米糖浆参照物检测结果图谱； 图2为蜂蜜样品检测结果图谱。
具体实施例方式实施例1 大米糖浆特征检测峰的确定第一步，多来源大米糖浆特征峰的确定
收集不同来源的大米糖浆，共收集到目前常用的四种大米糖浆，对其分别进行质谱检测，通过对比发现所有被检测大米糖浆中均大量含有质荷比为311.0742m/z的一种化合物。经验证该化合物为两分子单糖(葡萄糖或果糖)脱4分子水后形成的具有呋喃环结构的内醚糖。第二步，多来源蜂蜜中不含有大米糖浆特征物的确认
收集国内的包括油菜、洋槐、荆条、山花、芝麻蜜、苜蓿蜜、杂花蜜、椴树蜜、荔枝蜜、葵花蜜、白蜜在内的11种不同蜜源的蜂蜜以及来自欧洲、美洲和亚洲等其他国家的天然蜂蜜进行质谱检测，均未出现质荷比为311. 0742m/z的离子峰，从而确定质荷比为311. 0742m/z的大米糖浆特征物不存在于天然蜂蜜当中。最终选择质荷比为311. 0742m/z的离子峰作为特征检测峰，用于蜂蜜中大米糖浆的掺假鉴别定性检测。实施例2定量检测中大米糖浆参照物的确定筛选基础常用的四种大米糖浆；
筛选标准(1)其糖分组成接近纯正蜂蜜；
(2)质谱检测结果中特征检测峰强度适中；
(3)可获取糖浆量足够多。最后确定大米糖浆参照物，并得到其检测图谱如图1所示。在确认参照物后，对参照物的稳定性进行了测试，测试时间为6个月，在6个月中发现该物质中大米糖浆的特征检测峰稳定存在。实施例3 大米糖浆检测方法的确定 1、前处理
准确称取0. 5 ( 士0. 01)g大米糖浆参照物于50mL玻璃离心管中，溶解于10. OmL水中， 超声至溶解，过水相滤膜后，供液相色谱一飞行时间质谱仪测定。2、仪器分析条件
液相色谱-飞行时间质谱条件
色谱柱Agilent Eclipse plus C18，1.8 Mm, 100 mmX2. 1 mm i.d，或相当者； 柱温35 °C ；流动相乙腈-ο. 1 %甲酸，梯度洗脱程序见表1 ；
流速0. 2 mL/min ；
进样量10 L；
离子源电喷雾离子源；
扫描方式正离子；
检测方式全扫描(full scan)；
毛细管电压3. 5 kV
干燥气温度325 V
干燥气流量(氮气)5 L/min
鞘气温度400 V
鞘气流量(氮气)12 L/min
雾化器压力45 psig
检测母离子311. 0742m/z
表1、梯度洗脱程序
时间(min)乙腈(％)0. 1% 甲酸(％)05954595590101390101559520595
实施例4 检测方法的重复性实验
在油菜、洋槐、荆条、山花、芝麻蜜、苜蓿蜜、椴树蜜、葵花蜜和白蜜中分别添加浓度为 2%，5%和20%的参照物，并且按照实施例3中的方法进行6次平行测定，得到总体平均回收率为97% 110%，方法的相对标准偏差为2. 2 % 7. 2 %。
实施例5 样品的定性、定量测试定性
将样品按照实施例3中的处理及检测方法，得到如图2所示的质谱图，与图1中的标准谱图对比，以相对保留时间和精确质量数为定性依据。在保留时间3. 5min左右，质荷比为 311. 0742m/z的为大米糖浆特征物，说明样品中含有大米糖浆。定量
标准曲线的制定
用去离子水配制浓度范围为0. 05mg/mL- lmg/mL的大米糖浆参照物溶液，按本专利实施例3中的方法进样，以峰面积对浓度作线性回归，其浓度与响应值有良好的线性关系，线性方程为 y=l. 16e+005x+l. 12e+003，相关性 R2 为 0. 999 以上。定量检测
计算图2中的峰面积，利用线性回归方程，得到蜂蜜中大米糖浆的掺入量为5. 6%。
权利要求
1.蜂蜜中大米糖浆掺假鉴别快速检测方法，包括样品前处理、液相分离、质谱检测三个步骤，其特征在于该方法是以质荷比为311. 0742m/z的离子峰为大米糖浆的特征检测峰的高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱检测法。
2.如权利要求1所述的快速检测方法，其特征是所述的液相分离条件为色谱柱选用 C18色谱柱；柱温为35 °C;流动相为A.乙腈一 B. 0.1 %甲酸，流速为0.2 mL/min ；采 用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，O 4mi η,Α 5 %,B:9 5%;4 5mi η, A 5% 9 O 9 5% 1 0%;5 1 3mi η , A 9 O B 1 O %； 1 3 1 5m i η , A 9 0% 5%、Β 1 0% 9 5 % ； 1 5 2 Omi η , A 5 B 9 5%，所述的液相分离采用在线阀切换技术。
3.如权利要求1所述的快速检测方法，其特征是所述的质谱检测采用电喷雾离子源； 在毛细管电压3. 5 kV;干燥气温度325 °C ；干燥气流量(氮气)5 L/min ；鞘气温度400 0C ；鞘气流量(氮气)12 L/min ；雾化器压力45 psig的条件下；进行正离子全扫描。
全文摘要
本发明涉及一种蜂蜜是否掺有大米糖浆的鉴别检测方法。本发明的目的在于针对目前造假蜂蜜中的大米糖浆，找到一种灵敏度高、针对性强、操作简单、检测时间短的蜂蜜中大米糖浆的快速鉴别检测方法。为了实现上述发明目的，本发明公开了一种蜂蜜中大米糖浆的快速检测方法，包括样品前处理、液相分离、质谱检测三个步骤。该方法是以质荷比为311.0742m/z的离子峰为大米糖浆的特征检测峰的高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱检测法。
文档编号G01N30/02GK102520092SQ20111043670
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月23日 优先权日2011年12月23日
发明者丁涛, 吴斌, 张睿, 徐锦忠, 汤娟, 沈崇钰, 陈磊 申请人:江苏中谱检测有限公司, 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心
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