专利名称：食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法。
背景技术：
人工合成色素广泛应用于食品工业，但这些化合物可能对人体产生的�：σ仓鸾ノ酥厥�。各国法规对允许添加的人工合成色素品种与添加量有不同规定。同一种人工合成色素有可能在一个国家被允许使用，而在另一国家禁用。因此，建立普适的筛查方法十分必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，是基于液相色谱/飞行时间质谱建立的食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，可同时定性、定量与确证。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案
食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法是基于液相色谱/飞行时间质谱建立的食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法。色素标准品亮黑、柠檬黄、喹啉黄、胭脂红、酸性紫7、苋菜红、酸性红2G、酸性黄 17、日落黄、诱惑红、坚牢黄、结晶丽春红6R、偶氮玉红、丽春红SX、萘酚蓝黑、间苯二酚黄、 靛蓝、酸性红沈、酸性红4、丽春红3R、酸性红52、萘酚黄色-S、荧光素钠、毛料绿色S、专利蓝五、坚牢绿FCF、亮蓝FCF、亮绿SF、酸性绿3、赤藓红、荧光桃红、孟加拉玫瑰红、新红、曙红 Y、橙色I和橙色II ；
所述的方法的具体步骤如下
1)筛查定性采用四通道锥孔电压扫描，调用已建立的质谱筛查数据库以分子式匹配模式自动检索，质量允许误差设置IOppm ；
2)确证对筛查发现的可疑化合物采用保留时间结合源内裂解进一步确证；
3)定量对于确证为违禁染料的化合物定量。根据化合物不同，分别采用优化的锥孔电压，基体工作曲线外标法定量；超过线性范围的样品，需要稀释。本发明的显著优点在于基于液相色谱/飞行时间质谱建立的食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，可同时定性、定量与确证。
图1为36种化合物的化学结构式。图2为筛查出样品中含有孟加拉红的流程图。图2-1为所建立的质谱筛查数据库截图；图2-2是检出孟加拉玫瑰红；图2-3是所筛查的孟加拉红质谱图；图2-4是筛查结果。图3为糖果中检出的荧光桃红，图3-1为荧光桃红标准品碎片离子质谱图，图3-2为糖果样品中所含荧光桃红的碎片离子质谱图。图4是可疑红菇样品总离子流色谱图与质谱确证图。图4-1为红菇样品总离子流色谱图(上)与标准品色谱图(下)；图4-2为可疑物的质谱图；图4-3为酸性红标准品质谱图。
具体实施例方式试剂和材料
色素标准品亮黑、柠檬黄、喹啉黄、胭脂红、酸性紫7、苋菜红、酸性红2G、酸性黄17、日落黄、诱惑红、坚牢黄、结晶丽春红6R、偶氮玉红、丽春红SX、萘酚蓝黑、间苯二酚黄、靛蓝、 酸性红沈、酸性红4、丽春红3R、酸性红52、萘酚黄色-S、荧光素钠、毛料绿色S、专利蓝五、 坚牢绿FCF、亮蓝FCF、亮绿SF、酸性绿3、赤藓红、荧光桃红、孟加拉玫瑰红、新红、曙红Y、橙色I和橙色II (表1);甲醇、乙腈、氨水、聚酰铵粉；G3玻璃沙芯漏斗，配带通气支口的150mL 磨口锥形瓶；Supleco SAX SPE 柱，500mg/3mL ； Waters Oasis MAX SPE 柱，60mg/3mL。1.2 仪器
Agilent 1240超高压液相色谱仪器，配有二极管阵列检测器(DAD)与Agilent 6224 飞行时间质谱仪(TOF-MS)；旋转蒸发仪；漩涡振荡器；离心机；固相萃取装置。1.3实验条件
色谱条件色谱柱安捷伦SB-C18柱，50\4.6111111，1.811111;流动相六5%甲醇(含 5mmol/L乙酸铵)，B 95%甲醇(含5mmol/L乙酸铵)；梯度洗脱，95% A，保持a^n，5mln内变化至50%，3mln变化至10 %，保持5mln，5mln内恢复至95%，梯度周期后维持5mln，流速 0. 2 mL/mln。采用DAD检测时，检测波长为多波长通道设置，分别为254、510、480、400、580、 630 nm ；进样量 2 μ L。质谱条件
质谱扫描范围100-1700 m/z ；扫描模式高分辨模式；脱溶剂气及雾化气氮气；脱溶剂气流量11 mL/mh，脱溶剂气温度360°C ；雾化压力50psl ；毛细管电压3500 V； 分液电压(skimmer) :65 V。定性扫描时，同时设置四电位锥孔电压为90、120、160、180V ； 定量时，采用优化的锥孔电压(表1)。采集数据过程同时采用第二根雾化喷针实时加入质量参比溶液校正质量校正轴，辅助校正溶液喷雾压力5 psi。三点质量校正，质量校正物质分别为 TFA anion (C2O2F3^ 112. 985587)、Purine (C5H5N3,119. 036320)和 Formate adduct (C19H19O8N3P3F24，966. 000725)；样品进样 2 μ L。样品前处理
不凝胶的糖类等可溶样品称取样品10. OOg(或者采用溶解样品，取适当体积比例)，加入约30m 50mL 70°C热水溶解，难溶的可以加热煮沸15mln，冷却后根据溶液的色泽深浅， 选择是否适当稀释体积(稀释的样品要重新折算称样量)，取全部或者部分经过稀释的溶液，加入2g 80目细度的聚酰胺粉，玻璃搅拌吸收色素，然后过G3玻璃沙芯漏斗，带通气支口的150mL磨口锥形瓶收集过层析柱液，用样品全部过滤后，用pH = 6 7的去离子水洗涤20-30mL，再以体积比为50%的甲醇50mL淋洗，抽真空1 2mln，将聚酰胺粉内吸收水分尽可能抽干然后，最后用含体积比为10%氨水的甲醇60mL，分2 3次洗脱聚酰胺粉上吸附的色素，洗脱至沙芯漏斗上的聚酰胺粉颗粒无色，往洗脱液中加入5mL冰醋酸中和氨水，然后55 60°C水浴旋转浓缩至溶液体积少于5mL，加去离子水定容至5mL，过水性滤膜上机。含可溶性凝胶的糖果样品称取样品10. 00g，加热溶解后直接加入聚酰胺粉，乘热过G3沙芯漏斗，以下同上述糖类样品的前处理。如果发现样品所含凝胶遇冷凝固，导致堵塞沙芯，使得样液过漏斗速率慢甚至无法通过沙芯的情况出现，则换用以下处理方式称取样品后，加去离子水，加热溶解，加入聚酰铵粉后，溶液转移到50mL离心管内，漩涡振荡 ImIn,低速3500rpm，5mln离心，弃去上层无色溶液，然后先后用去离子水、50%甲醇洗涤下层聚酰胺粉层，漩涡lm^i，弃去上层，最后采用含10%氨水的甲醇溶液脱色下层2次，漩涡振荡，然后离心，合并两次上层带色溶液，加入冰醋酸中和后，以下处理同上。含有不可溶固相物的样品如蜜饯，酱菜等，称取样品10. 00g，加热溶解色素后， 过滤，取滤液加入聚酰胺粉，以下处理同上。液体样品称取10. OOg样品，含气饮料、酒类样品先加热除去气泡，而后加入聚酰胺粉，以下处理同上。试验方法
筛查采用四通道锥孔电压扫描，调用已建立的质谱筛查数据库以分子式匹配模式自动检索，质量允许误差设置IOppm ；
确证对筛查发现的可疑化合物采用保留时间结合源内裂解进一步确证； 定量基体工作曲线外标法定量。超过线性范围的样品，需稀释。结果
2. 1化合物的分子结构信息化合物的分子结构信息见表1。表1 36种化合物的信息
权利要求
1.食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，其特征在于采用基于液相色谱/ 飞行时间质谱建立的食品中亮黑、柠檬黄、喹啉黄、胭脂红、酸性紫7、苋菜红、酸性红2G、酸性黄17、日落黄、诱惑红、坚牢黄、结晶丽春红6R、偶氮玉红、丽春红SX、萘酚蓝黑、间苯二酚黄、靛蓝、酸性红沈、酸性红4、丽春红3R、酸性红52、萘酚黄色-S、荧光素钠、毛料绿色S、专利蓝五、坚牢绿FCF、亮蓝FCF、亮绿SF、酸性绿3、赤藓红、荧光桃红、孟加拉玫瑰红、新红、曙红Y、橙色I和橙色II的食品中人工合成色素高通量快速筛查方法，并对可疑样品进行确证禾口定量。
2.根据权利要求1所述的食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，其特征在于所述的方法的具体步骤如下1)筛查采用四通道锥孔电压扫描，调用已建立的质谱筛查数据库以分子式匹配模式自动检索，质量允许误差设置IOppm ；2)确证对筛查发现的可疑化合物采用保留时间结合源内裂解进一步确证；3)定量对于确证为违禁染料的化合物定量；根据化合物不同，分别采用优化的锥孔电压，基体工作曲线外标法定量；超过线性范围的样品，需要稀释。
全文摘要
本发明公开了一种食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，是基于液相色谱/飞行时间质谱建立的食品中36种人工合成色素高通量快速筛查方法，可同时定性、定量与确证。
文档编号G01N30/02GK102507798SQ20111038414
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月28日 优先权日2011年11月28日
发明者张玉燕, 杨方, 钱疆, 陈健, 陈章捷, 陈驰 申请人:福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心
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