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专利名称：一种甘蔗分子标记page凝胶超快速银染检测方法
技术领域：
本发明涉及一种甘蔗分子标记PAGE凝胶的超快速银染检测方法。
背景技术：
甘蔗的分子标记技术近年来得到快速发展，目前针对甘蔗种质资源研究最
有效的分子标记技术为AFLP和SSR标记，对两种标记的扩增片段多用聚丙烯酰 胺凝胶，凝胶的显影有两种方式银染显影和放射性显影，放射性显影虽能较 清晰的显示扩增片段，但由于其实验成本过高及对从业人员身体危害比较大， 因此较少采用；银染方法通过甲醛将银离子还原出来，银离子与核酸结合从而 显出扩增带，达到显影的目的，其分辨率能够满足检测要求。
目前，所报道的银染方法多为常规银染方法和经过改良的方法，但依然存 在步骤多，所用试剂强碱强酸有毒，不仅耗时耗力，对人体也有一定的伤害， 而且显影的质量也有好有坏。

发明内容
本发明的目的是提出一种甘蔗分子标记PAGE凝胶的超快速银染检测方法， 该方法能有效提高银染的速度，同时减少一些有害试剂的使用。
本发明的目的通过以下步骤实现
1、 用5%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增物。
2、 将电泳好的凝胶放入染色液染色。
3、 将凝胶从染色液中取出，快速冲洗，放入显影液里显影。
4、 显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带。
本发明将传统的固定、染色、显影和定影四个步骤合成两个最简单的步骤， 同时减少了洗涤次数和时间，减少了固定液、定影液及乙酸、无水乙醇、碳酸 钠、硫代硫酸钠的使用，不仅大大减少了银染时间、试剂成本，同时也保证了 高质量的银染效果，相比较其他传统或改良银染和同位素方法具有较大的时间 成本优势。整个过程只需要10分钟时间，在保证快速少害的同时，又能进一步 提高银染显影质量，提高分子标记扩增带的检出率。
具体实施例方式
本发明的方法歩骤是
a、 用5%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增物。
1、 采用常规SSR标记和AFLP标记方法对甘蔗基因组DNA进行PCR扩增，获 得扩增产物；
2、 取3.8ul产物进行凝胶电泳检测。
b、 将电泳好的凝胶放入染色液染色。
1、 染色液的配置称2g硝酸银加入2L去离子水中配成0， 1%的染色液；
2、 将电泳好的凝胶放入染色液中染色5分钟。
c、 将凝胶从染色液中取出，快速冲洗，放入显影液里显影。
1、 显影液的配置30gNaOH， 15ml 37%甲醛加入到2L去离子水中；
2、 将染色好的凝胶用去离子水清洗5秒，放入显影液里显影4分钟左右。 D、显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带。
1、 显影完全后用清水清洗两次，晾干；
2、 胶片晾干后即可读带。
权利要求
1、一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方法，步骤如下1)、用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增产物；2)、将电泳好的凝胶放入染色液染色5分钟；3)、将凝胶从染色液中取出，用去离子水快速冲洗5秒，放入显影液里显影4分钟；4)、显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带。
2、 根据权利要求1所述的一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方 法，其特征是染色液为0.1%的硝酸银溶液。
3、 根据权利要求1所述的一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方 法，其特征是显影液为含有1.5%的氢氧化钠和0.5%甲醛的溶液。
全文摘要
一种甘蔗分子标记PAGE凝胶超快速银染检测方法，该方法包括以下步骤用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR标记和AFLP标记的PCR扩增物；将电泳好的凝胶放入染色液染色；将凝胶从染色液中取出，快速冲洗，放入显影液里显影；显影好的凝胶用蒸馏水清洗两次，晾干读带；本发明将传统的固定、染色、显影和定影四个步骤合成两个最简单的步骤，同时减少了洗涤次数和时间，减少了固定液、定影液及乙酸、无水乙醇、碳酸钠、硫代硫酸钠的使用，不仅大大减少了银染时间、试剂成本，同时也保证了高质量的银染效果，相比较其他传统或改良银染和同位素方法具有较大的时间成本优势。
文档编号G01N1/30GK101354348SQ20081005885
公开日2009年1月28日 申请日期2008年8月28日 优先权日2008年8月28日
发明者刘新龙, 吴才文, 艳 毕, 青 蔡 申请人:云南省农业科学院甘蔗研究所