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专利名称：桃树休眠解除的检测方法
技术领域：
属于设施果树栽培领域。
背景技术：
在桃树的促成栽培、提早促成栽培中，准确掌握桃树的休眠期， 是争取提前上市和栽培成功的关键，休眠时间过长推迟成熟期，休眠时间不足 不能够发芽。因此，对桃树休眠期的预测显得很重要。多年来科技工作者建立 了四种模型用于计算休眠期，即犹它模型、0 7'C模型、低于7'C模型、动态模 型。近年来郑州果树所等单位对桃树的休眠需冷量多个品种进行了估算，然而 这种估算值只是一个大致的需冷量数值，各计算模型的计算结果是不同的而且 相差很大。同一品种在不同地区之间、同一地区的不同年份之间采用相同模型 计算，也存在较大差异。桃树休眠时间的长短因脱叶时期、环境温度、水分状 况等差异而变。目前休眠期估算的方法是，在田间设置温度自动记录装置，记 录每一时刻的温度。每天采取枝条放入24"C培养箱中水培，每隔2天剪去枝条 基部0.5厘米露出新茬以利吸水，连续观察15天，发芽率能够超过50%的才算 解除休眠，那么这一天与休眠开始期间所经历的有效低温时间作为这个品种的 休眠小时数，也可叫做需冷量。采用这种方法虽然知道了桃树的休眠期，但时 间已经过去了半个月，作为生产上应用为时已晚；采用需冷量估算的方法不仅 需要进行为期近2个月的温度记录和温湿度管理，而且带有很大的盲目性。
用于种子生活力测定的方法——四唑测定于1942年由德国Soealed Hoheneim学校的H. LakOn(莱康)教授发明，目前已经成为全世界最先进和实用 的种子四唑测定技术，在650多个属和种的农业、蔬菜、林木、牧草、药材和 花卉种子中得到应用。四唑测定具有原理可靠、结果准确、不受休眠限制、方法简便、省时快速、成本低廉等特点。所以四唑测定是世界公认并得到广泛应 用的种子生活力测定方法之一。
发明目的本发明的主要目的是探索一种简单、方便、快速准确、成本低廉， 能够指示桃树花芽休眠解除的方法。

发明内容
桃树生长发育到一定阶段即进入休眠状态，休眠期是一个生长相 对缓慢的发育时期，是花芽生长到一定阶段后积极的生理反映。这个花芽的发 育时期需要7'C左右的低温支持，在这个过程中花芽的形态和内含物发生着极其 细微的变化，当休眠到一定程度将发生质的变化，即解除了休眠期。休眠解除 时期的及时准确掌握，是设施果树开始升温的指导依据。将测定种子生活力的 四唑染色方法运用到桃树花芽休眠的检测上，是一种新的尝试，本来种子生活 力的测定不受休眠限制，而在这里却用于检测花芽休眠。这项技术是建立在试 验基础之上的，试验要求花芽在规定时间内能够染色才是解除休眠，种子染色 则需要预处理和较长时间，这是桃树休眠生理与种子生洁力测定原理相结合的 产物。
休眠检测原理桃树真休眠后期，能量代谢从磷酸戊糖途径(PPP)转换为 三羧酸循环途径(TCA);四唑溶液做为一种无色的指示剂被芽吸收，接受细胞 内三羧酸代谢途径中释放出来的氢离子，被还原成一种红色、稳定、不会扩散 和不溶于水的三苯基甲替。其特点是检测方法简单，速度快，可以实现即时检
试剂的配制
四唑染色液四唑全称为2， 3， 5-氯化(或溴化)三苯基四氮唑，简称为四唑
或红四唑。英文名为2， 3， 5-Triphenyl TetrazoliumChloride(Or Bromide),縮写TTC(TTB)或TZ。分子式为C19H15N4C1，分子量334.8，为白色或淡黄色的粉剂， 溶点243°C，易溶于水，具有微毒。四唑染色通常使用浓度为0. 1% 1.0%的四 唑溶液。称取1. 0克红四唑溶于100克蒸馏水中即为1. 0%的四唑溶液。四唑遇 到直射光线会被还原成粉红色，因此，该试剂需用棕色瓶盛装，并用黑纸外面 包装。同样，己配好的四唑溶液也应装入棕色玻璃瓶里，存放在暗处。在进行 休眠解除的检测时，也需将其放在暗处。
磷酸缓冲液的配制为保证四唑的染色效果，要求四唑溶液的pH值必须在 6.5 7.5范围之内。当四唑溶液的pH值不在这一范围之内时，建议采用磷酸缓 冲液来配制。首先配两种母液I和II，母液I为称取9. 087克磷酸二氢钾溶于 1000毫升蒸馏水中，母液II为称取9. 472克磷酸氢二钠溶于1000毫升蒸馏水 中，然后取母液I 2份和母液I1 3份混合而成。
用磷酸缓冲液配制四唑溶液的方法取母液I 40毫升和母液I1 60毫升混 合，称取1. 0克四唑粉末，用上述混合液定容至100毫升，即为pH值7. 5的1. 0% 的四唑溶液。
具体实施例方式将花芽纵切，用O. 1% 1.0%的四唑水溶液浸泡，要求四唑溶 液的pH值必须在6. 5 7. 5范围之内，四唑溶液可以采用磷酸缓冲液来配制。 显色反应的温度范围为20 °C 45 "C，在设定的温度下于黑暗处进行显色反应。 要求的显色时间为20分钟到2小时，在要求时间内花芽切面显示红色为解除休 眠。鉴定时借助放大镜或解剖显微镜观察。用过的四唑溶液不可以重复使用。
实施例1: 取正在休眠阶段或休眠刚刚解除或休眠已经解除的桃树花芽，用刀 片将花芽纵切，放入染色皿中，加入1.0%浓度的四唑水溶液，以淹没芽片为度，移置在35 'C恒温箱内进行染色反应，恒温箱内要保持黑暗。若没有恒温箱也可 以用人的体温捂热染色皿进行显色反应。显色反应1小时，借助放大镜或解剖 显微镜观察，花芽切片染成红色的为花芽已经解除休眠期。
实施例2: 取正在休眠阶段或休眠刚刚解除或休眠己经解除的桃树花芽，用刀
片将花芽纵切，放入染色皿中，加入用磷酸缓冲液配制的pH值7. 5的1. 0%的四 唑溶液。以淹没芽片为度，移置在35 'C恒温箱内进行染色反应，恒温箱内要保 持黑暗。若没有恒温箱也可以用人的体温捂热染色皿进行显色反应。显色反应l 小时，借助放大镜或解剖显微镜观察，花芽切片染成红色的为花芽已经解除休 眠期。
权利要求
1、一种桃树休眠解除的检测方法，其特征是将花芽纵切，用四唑溶液浸泡，在设定的温度下于黑暗处进行显色反应，于规定的时间内花芽切面显示红色为解除休眠。
2、 根据权利要求1所述的桃树休眠解除的检测方法，其特征是 所述的四唑溶液为2， 3， 5-氯化(或溴化)三苯基四氮唑，简称 为四唑或红四唑0. 1% 1. 0%的水溶液。要求四唑溶液的pH值必须在6. 5 7. 5范围之内，四唑溶液可以采用磷酸缓冲液来配 制。
3、 根据权利要求1所述的桃树休眠解除的检测方法，其特征是所述的设定温度为显色反应的温度范围为2(TC 45i:。
4、 根据权利要求1所述的桃树休眠解除的检测方法，其特征是所述的显色反应时间为20分钟到2小时。
全文摘要
该项技术属于设施果树栽培领域。桃树生长发育到一定阶段即进入休眠状态，休眠期是一个生长相对缓慢的发育时期，这个发育时期需要7℃左右的低温支持，在这个过程中花芽的形态和内含物发生着极其细微的变化。当休眠到一定程度将发生质的变化，即解除了休眠期。如果休眠时间过长将推迟成熟期，休眠时间不足则不能够发芽，因此，休眠解除时期的及时、准确掌握，是设施果树开始升温的指导依据。在桃树的促成栽培、提早促成栽培中，准确掌握桃树的休眠期，是争取提前上市和栽培成功的关键。而采用需冷量估算的方法不能满足生产需要。这里提供了一种简单、方便、快速准确、成本低廉，能够指示桃树花芽休眠解除的方法。
文档编号G01N21/78GK101514965SQ200810074139
公开日2009年8月26日 申请日期2008年2月22日 优先权日2008年2月22日
发明者友 傅, 张新生, 王召远, 王学军, 湖 陈 申请人:河北省农林科学院昌黎果树研究所