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一种1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的分析检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种对1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的分析检测方法。本发明采用高效液相色谱法，色谱条件为：聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物色谱柱：MKF-RP-HH，柱规格：柱长为100～300mm，柱内径为4.0～8.0mm，填料粒径为：4～8μm；流动相：乙腈／水，洗脱梯度：在6-10min，50～75％乙腈升至85～100％乙腈；流速：0.8～1.2mL／min；检测波为：214±10nm和或250±10nm；进样量：10～20μL；使用双波长或单波长检测模式，在最大检测灵敏度条件下对1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质进行了检测，方法简单，快速，准确。
【专利说明】一种1-苯基-2-硝基丙稀及其相关物质的分析检测方法 (一）

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高效液相色谱（HPLC)分析检测方法，具体涉及一种以聚苯乙烯 二乙烯基苯色谱介质为分离载体的分析检测1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的方法。 (二）

【背景技术】
[0002] 在化学合成方面，1-苯基-2-硝基丙烯（MNS)可作为一种重要的合成中间体，通过 不同方法转变成多种官能团，得到不同类型的化合物，例如：胺、腈、醇、醛、酮等化合物。在 生物学方面，MNS具有明显的抗肿瘤及杀菌作用，可以作为一种高效的抗肿瘤药物，因此，对 1-苯基-2-硝基丙烯的质量控制非常重要。
[0003] 丽S合成过程中的主要相关物质为硝基乙烷和苯甲醛。硝基乙烷的一般检测方 法为气相色谱法，而苯甲醛的传统的测定方法则有气相色谱法、单波长紫外吸收法和高效 液相色谱法[参文献：高敏，曾新安，肖利民.青梅酒中苯甲醛含量的测定[J].酿酒科技， 2009,（5) :110?112]。但关于MNS的测定，及对相关物质的分析检测，尚未见有关文献报 道。MNS的沸点比较高，为263°C (at760mmHg)，且在高温条件下易聚合，而气相色谱法要求 的检测温度要高于被检测物质的沸点，所以气相色谱法不适合于三种物质的分离检测。因 此开发一种操作快速简单，分析成本较低的检测方法分析测定1-苯基-2-硝基丙烯及其相 关物质具有重要意义。
[0004] 本发明主要采用聚合物色谱柱与双波长或单波长检测模式，优化了流动相梯度， 在最大检测灵敏度的条件下对1-苯基-2-硝基丙烯及相关物质进行了快速检测。该方法 简单，分析速度快，灵敏度高，节约成本，分析效果好。 (三）
【发明内容】
本发明的目的是开发研究一种能对1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质进行快速、准确 检测的分析检测方法。 本发明的技术方案如下，一种1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的高效液相色谱快速 分析检测方法，其特点在于采用一种多孔型聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为固定相的高聚 物色谱柱与双波长或单波长检测模式，高效液相色谱操作条件为： a.高聚物色谱柱:MKF-RP-HH(南京麦科菲高效分离载体有限公司），柱规格：柱长为 100?300mm,柱内径为4. 0?8. 0mm,填料粒径为：4?8 μ m ; 13.流动相：乙腈/7欠，洗脱梯度：在6-1011^11，50?75%乙腈升至85?100%乙腈 ； c. 流速：0· 8?L 2mL/min，进样量：10?20μ L，柱温：室温； d. 采用UV检测器，检测波长为214±10nm和或250±10nm。 与现有技术相比，本发明的优点和效果如下： 1、 选用高聚物色谱柱，流动相梯度为：在6-10min，50?75 %乙腈升至85?100 %乙腈 的范围内，1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质达到了有效的分离。 2、 采用双波长或单波长检测模式，在相关物质最大灵敏度条件下对其进行测定，能准 确测定相关物质的含量。 3、本发明操作简单，分析成本低，为1-苯基-2-硝基丙烯的质量检测提供了技术支持。 (四） 【专利附图】

【附图说明】： 图1(液相色谱图）为本发明的举例方法效果图之一，即具体条件：色谱柱： MKF-RP-HH (柱规格：柱长为250mm，柱内径为4. 6mm，填料粒径为：6 μ m);流动相：乙腈和 水；洗脱梯度：74%乙腈一92%乙腈（0 - 811^11)，检测波长：21411111和25〇11111;流速：1.〇11117 min ;进样物质：供试品溶液。进样量：20 μ L。图1 (液相色谱图）中1、2、3和4分别代表 硝基乙烷峰、苯甲醛峰、1-苯基-2-甲基亚硝酸乙烯酯和1-苯基-2-硝基丙烯峰。图1 (液 相色谱图）为本发明的举例方法效果图之一，其它举例方法图不一一给出。 (五） 【具体实施方式】 实验器材及试剂： (1) 实验仪器： 戴安Summit型高效液相色谱系统（美国戴安公司），配备P680HPLC泵，UVD-170U可变 波长紫外检测器，AT-330柱温箱、8125型进样装置；工作站（美国戴安Chromeleon系统） (2) 色谱条件： 色谱柱:MKF-RP-HH(南京麦科菲高效分离载体有限公司），柱规格：柱长为100? 300mm，柱内径为4.0?8. 0mm，填料粒径为：4?8μπι;流动相：乙腈和水；洗脱梯度：在 6-10min，50?75%乙腈升至85?100%乙腈；检测波长：214± 10nm和或250± 10nm双波 长或单波长检测模式；流速：〇. 8?1. 2mL/min ;进样量：10?20 μ L ;柱温：室温。 (3) 实验试剂： 1-苯基-2-硝基丙烯供试品（合成），1-苯基-2-硝基丙烯标准品（美国 sigma-Aldrich化工试剂生产公司），苯甲醒和硝基乙烧（国药集团化学试剂有限公司）； 色谱纯乙腈（德国merck公司），超纯水（自制）。 供试品溶液的配制：取1-苯基-2-硝基丙烯供试品约2mg，精密称定，用乙腈定容至 10mL，待测（现用现配） 对照品溶液的配置： 对照品_1 :取1_苯基_2_硝基丙烯标准品约2mg，精密称定，用乙臆定容至10mL，待测 (现用现配） 对照品-2 :取10 μ L硝基乙烧，用乙腈定容至10mL。取上溶液用乙腈稀释至10. 5 μ g/ mL，待测（现用现配） 对照品-3 :取10 μ L苯甲醒，用乙腈定容至10mL。取上溶液用乙腈稀释至10. 4 μ g/mL， 待测（现用现配） 实施例1 色谱条件：检测机器：戴安Summit型高效液相色谱系统；色谱柱:MKF-RP-HH(柱规格： 柱长为250臟，柱内径为4. 6臟，填料粒径为：8 μ m);流动相：乙腈和水；洗脱梯度：74%乙 腈一92(%乙腈（0 - 8111；[11)，流速：1.01]117111；[11;检测波长：214111]1和25〇11111 ;进样物质：供试品 溶液与对照品-1、-2和_3。进样量：20 μ L。结果：1_苯基-2-硝基丙烯及其相关物质均 达到了基线分离，分离度均大于1. 5。 实施例2 色谱条件：检测仪器、流动相、进样物质同实施例1，色谱柱:MKF-RP-HH (柱规格： 柱长为150mm，柱内径为4. 6mm，填料粒径为：6 μ m);洗脱梯度：70%乙腈一89%乙腈 (0 - 6min);流速：0. 8mL/min ;检测波长：214nm ;进样量：10 μ L。结果：1-苯基-2-硝基丙 烯及其相关物质均达到了基线分离，分离度均大于1. 5。 实施例3 色谱条件：检测仪器、流动相、进样物质同实施例1，色谱柱：MKF-RP-HH(柱规格： 柱长为100mm，柱内径为4. 0mm，填料粒径为：4 μ m);洗脱梯度：60%乙腈一100 %乙腈 (0- lOmin);流速：0. 9mL/min;检测波长：250nm;进样量：15yL。结果：1-苯基-2-硝基 丙烯及其相关物质均达到了基线分离，分离度均大于1. 5。 实施例4 色谱条件：检测仪器、流动相、进样物质同实施例1，色谱柱:MKF-RP-HH (柱规格： 柱长为300mm，柱内径为8.0mm，填料粒径为：9 μ m);洗脱梯度：50%乙腈一98%乙腈 (0 - 7min);流速：L OmL/min ;检测波长：214和250nmn ;进样量：20μ L。结果：1-苯 基-2-硝基丙烯及其相关物质均达到了基线分离，分离度均大于1. 5。 实施例5 色谱条件：检测仪器、流动相、进样物质同实施例1，色谱柱:MKF-RP-HH(柱规格： 柱长为200mm，柱内径为7.0mm，填料粒径为：8 μ m);洗脱梯度：75%乙腈一85%乙腈 (0 - 9min);流速：1. lmL/min ;检测波长：214nm ;进样量：10 μ L。结果：1-苯基-2-硝基丙 烯及其相关物质均达到了基线分离，分离度均大于1. 5。 实施例6 色谱条件：检测仪器、流动相、进样物质同实施例1，色谱柱:MKF-RP-HH (柱规格： 柱长为250mm，柱内径为4. 6mm，填料粒径为：5μπι);洗脱梯度：55%乙腈一95%乙腈 (0 - 6min)，流速：0. 8mL/min检测波长：250nm进样量：15 μ L。结果：1-苯基-2-硝基丙烯 及其相关物质均达到了基线分离，分离度均大于1. 5。
【权利要求】
1. 一种1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的高效液相色谱分析检测方法，其特征在于 使用高效液相色谱仪，其色谱条件为： a.高聚物色谱柱的选用：MKF-RP-HH型色谱柱，柱规格：柱长为100?300mm，柱内径为 4. 0?8. 0mm,填料粒径为：4?8 μ m ;
13.流动相：乙腈/7欠，洗脱梯度：在6-1011^11，50?75%乙腈升至85?100%乙腈 ； c. 流速：0.8?L2mL / min，进样量：10?20yL，柱温：室温； d. 采用UV检测器，检测波长为214±10nm和或250±10nm双波长或单波长检测模式。
2. 根据权利要求1所述的1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的高效液相色谱分析检 测方法，其特征在于，所述的色谱柱为以聚苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB)为基质。
3. 根据权利要求1所述的1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的高效液相色谱分析检 测方法，其特征在于，采用214±10nm和250±10nm双波长检测模式，也可采用214nm±10 或250 ± 10nm单波长检测模式。
4. 根据权利要求1所述的1-苯基-2-硝基丙烯及其相关物质的高效液相色谱分析检 测方法，其特征在于，其相关物质为硝基乙烷或苯甲醛或其光异构化产物1-苯基-2-甲基 亚硝酸乙烯酯。
【文档编号】G01N30/02GK104142370SQ201410001986
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年1月3日 优先权日:2014年1月3日
【发明者】刘晓宁, 徐艳, 魏荣卿 申请人:南京工业大学