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一种丹天颈舒口服制剂的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种丹天颈舒口服制剂的检测方法，所述丹天颈舒口服制剂由丹参、天麻、钩藤、石决明、杜仲、川芎、栀子及辅料制备而成，所述检测方法包括对口服制剂中天麻素的含量进行测定，对口服制剂中的丹参、钩藤、杜仲、川芎及栀子分别进行薄层色谱鉴别。所述检测方法准确，灵敏度高，重复性好，检测结果稳定，可有效控制丹天颈舒口服制剂的质量。
【专利说明】—种丹天颈舒口服制剂的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种丹天颈舒口服制剂的检测方法，属于药品技术的领域；
【背景技术】
[0002]椎动脉型颈椎病是因为椎动脉受压迫或刺激而引起其供血不足所产生的一系列症状。颈椎是活动量最大的脊柱节段，易产生劳损，并随着年龄的增长及损伤的积累而发生颈椎退行性变。颈椎病患者中约70%有椎动脉受累，50岁以上头晕，椎动脉缺血性疾病者，50%以上与颈椎病引起的椎基底动脉受累有关。在临床上易有〃颈椎眩晕〃，〃椎动脉压迫综合症"等诊断，又称为"颈性偏椎动脉缺血性疾病"。椎动脉型颈椎病是由各种机械性与动力性因素致使椎动脉遭受刺激或压迫，以致血管狭窄、折曲而造成以椎一一基底动脉供血不全为主要症状的症候群。其发病机制主要有动力性因素及血管因素。随着人类生活节奏的加快，工作压力的增大，使得患有椎动脉型颈椎病(CSA)的人越来越多，而且发病年龄呈下降趋势，严重影响了人们的生活质量。丹天颈舒制剂来源于汤剂“消晕饮”，由天麻、丹参等七味中药组成，是贵阳中医学院全国骨伤名医沈冯君教授35年的经验方，具有平肝补肾，活血化瘀的功效；临床用于治疗肝肾亏虚、气滞血瘀而致的椎动脉型颈椎病(眩晕型)效果良好；为了更好的控制该药品的质量，为此，本发明提供了丹天颈舒制剂的检测方法。

【发明内容】

[0003]本发明所要解决的技术问题在于，提供一种丹天颈舒口服制剂的检测方法；所述检测方法能够测定丹天颈舒口服制剂中天麻素的含量，还能对口服制剂中的丹参、钩藤、杜仲、川芎和桅子进行鉴别，本发明所述检测方法便于操作，重复性好，结果可靠；
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现:
[0005]一种丹天颈舒口服制剂，按照重量组分计算，由丹参200-700份、天麻200-700份、钩藤200-700份、石决明600-1200份、杜仲300-800份、川芎200-700份、桅子200-700份及辅料制备而成；
[0006]具体地说，所述丹天颈舒口服制剂按照重量组份计算，由丹参500份、天麻500份、钩藤500份、石决明900份、杜仲625份、川芎500份、桅子500份及辅料制备而成；
[0007]其制备方法为:根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，再加入辅料按照常规工艺制备成口服制剂；
[0008]具体地说，其制备方法为:根据配方称取各药物，加入6-12倍量水煎煮1-3次，每次0.5-3小时，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，再加入辅料按照常规工艺制备成口服制剂；
[0009]所述检测方法包括对口服制剂中天麻素的含量进行测定，对口服制剂中的丹参、钩藤、杜仲、川芎及桅子分别进行薄层色谱鉴别。
[0010]上述检测方法中，所述天麻素的含量测定方法为:照中国药典高效液相色谱法测定;[0011]色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.05%磷酸溶液=1-10:99-90为流动相；检测波长为220nm ;理论板数按天麻素峰计算应不低于5000 ；
[0012]对照品溶液的制备:精密称取天麻对照品，用流动相溶解，即得；
[0013]供试品溶液的制备:称取制剂药物，精密称定，加蒸馏水超声5_20min使溶解，放冷，滤过，取续滤液即得；
[0014]测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
[0015]具体地说，所述天麻素的含量测定方法为:照中国药典高效液相色谱法测定；
[0016]色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.05%磷酸溶液=8:92为流动相；流速1.0mL.mirT1，检测波长为220nm ;理论板数按天麻素峰计算应不低于5000 ；
[0017]对照品溶液的制备:精密称取在80°C减压干燥Ih的天麻对照品适量，加流动相制成每ImL含30 μ g的溶液，即得；
[0018]供试品溶液的制备:称取制剂药物0.2g,精密称定，至50mL容量瓶内，加蒸馏水适量超声IOmin使溶解，放冷，定容至刻度，滤过，取续滤液即得；
[0019]测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
[0020]上述检测方法中，所述钩藤的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干,加水30mL使溶解,加入浓氨水调PH值至9，氯仿萃取3次，每次25mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取钩藤对照药材
2.5g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L,分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的娃胶G薄层板上,氨水缸饱和后，以氯仿:乙酸乙酯=5: 3为展开剂，展开，取出，晾干；喷以改良碘化铋钾试液显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0021]上述检测方法中，所述川芎的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取Ih,滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，氯仿萃取3次，每次25mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取川芎对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，氨水缸饱和后，以氯仿:乙酸乙酯=10: 3为展开齐U，展开，取出，晾干；365nm紫外灯下观察；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0022]上述检测方法中，所述桅子的薄层鉴别方法为:取药物3g，加入丙酮50mL，60°C水浴回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试品溶液；另取桅子对照药材2.5g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以甲苯:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸=2:3:4:2: 2为展开剂，展开，取出，晾干；254nm紫外灯下观察后，喷以10%硫酸乙醇试液，在105°C下烘至显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0023]上述检测方法中，所述丹参的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，乙醚萃取3次，每次25mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取丹参对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的娃胶GF254薄层板上，以甲苯:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸=2: 3: 4: I: 2为展开剂，展开，取出，晾干；254nm紫外灯下观察后，喷以2%三氯化铁-1%铁氰化钾试液显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0024]上述检测方法中，所述杜仲的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，乙醚萃取3次，每次25mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取杜仲对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯:氯仿:乙酸乙酯:甲酸=5: I: I: 0.5为展开剂，展开，取出，晾干；365nm紫外灯下观察后，喷以2%三氯化铁-1 %铁氰化钾试液显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0025]发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述检测方法的研究
[0026]实验例:检测方法研究
[0027]I仪器与试药
[0028]1.1仪器:日本岛津LC - 20A型液相色谱仪，SPD 一 20A型紫外一可见检测器(日本岛津)，HT - 20型柱温箱JA2003型电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)；Auy220型电子天平(日本岛津)；科导SK8210HP型台式超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；杜仲F-6210真空干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)；WBZ-2微波真空干燥箱(贵阳新奇微波工业有限责任公司)；SZ-96自动纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；LRH-150S恒温恒湿培养箱(广东省医疗器械厂);ZB-1C智能崩解仪(天津大学精密仪器厂);TDL-5A低速自动离心机(湖南星科科技有限公司)；WD-A稳定性检查仪(天津药典标准仪器厂)；DC-B-1智能箱式电阻炉(北京独创科技有限公司)。
[0029]1.2试药:天麻素(中国药品生物制品检定所，批号:0807-200104);处方中各味药材均购自贵阳药材总公司，均符合药典的检测标准；硅胶G、硅胶GF254 (青岛海洋化工)，色谱级甲醇(江苏汉邦科技有限公司)，色谱级乙睛(江苏汉邦科技有限公司)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
[0030]丹天颈舒胶囊按照下述方法制备:取丹参500g、天麻500g、钩藤500g、石决明900g、杜仲625g、川芎500g、桅子500g ;加入8倍量水煎煮3次，每次1.5小时，滤过，滤液浓缩至稠膏，微波真空干燥，粉碎，加入淀粉，装胶囊，制成1000粒，每粒0.45g，即得。
[0031]2.鉴别
[0032]2.1丹参的薄层鉴别
[0033]取胶囊内容物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，乙醚萃取3次，每次25mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液。另取丹参对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液。同法制备缺丹参的阴性对照溶液。照药典附录VI B薄层色谱法试验。吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的娃胶GF254薄层板上，以甲苯-氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2: 3: 4:1: 2)为展开剂，展开，取出，晾干。254nm紫外灯下观察后，喷以2%三氯化铁-1 %铁氰化钾试液显色。经三批样品实验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰(薄层色谱图见图1、图2)。
[0034]2.2钩藤的薄层鉴别
[0035]取胶囊内容物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，加入浓氨水调PH值至9，氯仿萃取3次，每次25mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液。另取钩藤对照药材2.5g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液。同法制备缺钩藤的阴性对照溶液。照药典附录VI B薄层色谱法试验。吸取上述三种溶液各10 μ L,分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的娃胶G薄层板上,氨水缸饱和后，以氯仿-乙酸乙酯(5: 3)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以改良碘化铋钾试液显色。经三批样品试验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰(薄层色谱图见图3)。
[0036]2.3川芎的薄层鉴别
[0037]取胶囊内容物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，氯仿萃取3次，每次25mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液。另取川芎对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液。同法制备缺川芎的阴性对照溶液。照药典附录VI B薄层色谱法试验。吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，氨水缸饱和后，以氯仿-乙酸乙酯(10: 3)为展开剂，展开，取出，晾干。365nm紫外灯下观察。经三批样品试验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点斑点。阴性对照无干扰(薄层色谱图见图4)。
[0038]2.4杜仲的薄层鉴别
[0039]取胶囊内容物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，乙醚萃取3次，每次25mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液。另取杜仲对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液。同法制备缺杜仲的阴性对照溶液。照药典附录VI B薄层色谱法试验。吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5: I: I: 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。365nm紫外灯下观察后，喷以2%三氯化铁-1 %铁氰化钾试液显色。经三批样品实验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰(薄层色谱图见图5、图6)。
[0040]2.5桅子的薄层鉴别
[0041]取胶囊内容物3g，加入丙酮50mL，60°C水浴回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试品溶液。另取桅子对照药材2.5g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液。同法制备缺桅子的阴性对照溶液。照药典附录VI B薄层色谱法试验。吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以甲苯-氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2:3:4:2: 2)为展开剂，展开，取出，晾干。254nm紫外灯下观察后，喷以10%硫酸乙醇试液，在105°C下烘至显色。经三批样品实验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰(薄层色谱图见图7、图8)。[0042]3.天麻素含量测定的方法学研究
[0043]照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。
[0044]3.1色谱条件
[0045]色谱柱为Agilent HC-C18 柱(250_Χ4.6mm, 5 μ m);流动相为甲醇:0.05%憐酸溶液(8: 92)，流速1.0mL.mirT1,检测波长220nm，进样量10 μ L，柱温为室温。
[0046]3.2对照品溶液的制备
[0047]取经80°C干燥至恒重的天麻素对照品3.50mg,置25mL容量瓶中，精密称定，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀，得0.14mg.πι1的对照品母液，精密吸取2mL母液置IOmL容量瓶内，稀释至刻度，即得0.028mg.πι1的对照品溶液。
[0048]3.3提取溶剂的考察
[0049]精密称取丹天颈舒胶囊内容物lg，精密称定，分别加入下表中各种溶剂lOOmL，精密称定，超声提取30min，放冷，加入相应的溶剂补足重量，除以蒸馏水作为溶剂外，其余样品液，分别滤过，精密吸取续滤液10mL，蒸干，加适量流动相溶解，转移至IOmL容量瓶内，分别定容至刻度，滤过，续滤液供含量测定。结果见表1。
[0050]表1提取溶剂的考察
【权利要求】
1.一种丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述丹天颈舒口服制剂按照重量组分计算，由丹参200-700份、天麻200-700份、钩藤200-700份、石决明600-1200份、杜仲300-800份、川芎200-700份、桅子200-700份及辅料按照下述方法制备而成:根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，再加入辅料按照常规工艺制备成常规口服制剂；所述检测方法包括对口服制剂中天麻素的含量进行测定，对口服制剂中的丹参、钩藤、杜仲、川芎及桅子分别进行薄层色谱鉴别。
2.如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述天麻素的含量测定方法为:照中国药典高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.05%磷酸溶液=1-10:99-90为流动相；检测波长为220nm ;理论板数按天麻素峰计算应不低于5000 ； 对照品溶液的制备:精密称取天麻对照品，用流动相溶解，即得； 供试品溶液的制备:称取制剂药物，精密称定，加蒸馏水超声5-20min使溶解，放冷，滤过，取续滤液即得； 测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
3.如权利要求2所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述天麻素的含量测定方法为:照中国药典高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.05%磷酸溶液=8:92为流动相；流速1.0mL.mirT1,检测波长为220nm ;理论板数按天麻素峰计算应不低于5000 ；` 对照品溶液的制备:精密称取在80°C减压干燥Ih的天麻对照品适量，加流动相制成每ImL含30 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备:称取制剂药物0.2g,精密称定，至50mL容量瓶内，加蒸馏水适量超声IOmin使溶解，放冷，定容至刻度，滤过，取续滤液即得； 测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
4.如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述制剂中钩藤的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，加入浓氨水调PH值至9，氯仿萃取3次，每次25mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取钩藤对照药材2.5g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，氨水缸饱和后，以氯仿:乙酸乙酯=5: 3为展开剂，展开，取出，晾干；喷以改良碘化铋钾试液显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述制剂中川芎的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，氯仿萃取3次，每次25mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取川芎对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，氨水缸饱和后，以氯仿:乙酸乙酯=10: 3为展开剂，展开，取出，晾干；365nm紫外灯下观察；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述制剂中桅子的薄层鉴别方法为:取药物3g，加入丙酮50mL，60°C水浴回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试品溶液；另取桅子对照药材2.5g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以甲苯:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸=2: 3: 4: 2: 2为展开剂，展开，取出，晾干；254nm紫外灯下观察后，喷以10%硫酸乙醇试液，在105°C下烘至显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述制剂中丹参的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，乙醚萃取3次，每次25mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取丹参对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以甲苯:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸=2:3:4:1: 2为展开剂，展开，取出，晾干；254nm紫外灯下观察后，喷以2%三氯化铁-1%铁氰化钾试液显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.如权利要求1所述丹天颈舒口服制剂的检测方法，其特征在于:所述制剂中杜仲的薄层鉴别方法为:取药物3g，加甲醇50mL，回流提取lh，滤过，滤液水浴挥干，加水30mL使溶解，乙醚萃取3次，每次25mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为样品供试液；另取杜仲对照药材3g，按样品供试液制备方法制备对照药材溶液；照药典附录薄层色谱法试验；吸取上述三种溶液各10 μ L，分别点于同一以0.5%CMC-Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯:氯仿:乙酸乙酯:甲酸=5:1:1: 0.5为展开剂，展开，取出，晾干；365nm紫外灯下观察后，喷以2%三`氯化铁-1%铁氰化钾试液显色；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【文档编号】G01N30/02GK103823016SQ201410083023
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年3月7日 优先权日:2014年1月6日
【发明者】张永萍, 沈冯君, 徐剑, 缪艳燕, 吴静澜, 杨芳芳, 刘毅 申请人:贵阳中医学院