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利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方法
【专利摘要】本发明提供了一种利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方法，该高效液相色谱分析方法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，配备紫外检测器；流动相由流动相A、流动相B组成；采用15～25mmol/L磷酸氢二钠缓冲液(含0.01％三乙胺，用磷酸调pH至6.0～6.9)作为流动相A；采用乙腈作为流动相B，洗脱方式采用梯度洗脱。该方法能够准确测定安立生坦及其制剂的含量，且该方法准确度高、专属性强。
【专利说明】利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方法

【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析【技术领域】，涉及安立生坦及其制剂含量的分析方法，具体地， 涉及利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方法。

【背景技术】
[0002] 肺动脉高压是指各种原因引起的肺动脉压力持久增高，为罕见的慢性综合病症， 表现为肺动脉缩小、破损及血压过高。肺动脉血管壁的增厚和损伤会促使血管缩小，小的血 液凝块会在血管中形成，最终导致血管阻塞。因为右侧也肌不如左侧也肌强健，更容易受 到损伤，因此血管阻力的增加会加重右侧也脏的工作负荷，最终导致患者右也衰竭而死亡。 右也衰竭是所有类型肺动脉高压患者致残、致死的共同唯一因素，而肺动脉高压也是右也 衰竭的最主要原因，其病因复杂，诊断、治疗棘手是该治疗领域长期W来发展缓慢的主要原 因。
[0003] 安立生坦（Ambrisentan)是一种新型的口服内皮素受体枯抗剂巧RA)，该药物于 2007年6月15日获得美国抑A批准，口服用于治疗肺动脉高血压，目前在国外已上市的为 规格Smg和IOmg片剂。安立生坦及其巧惊U含量的分析方法尚未见报道。
[0004] 因此，对安立生坦及其制剂含量的分析方法的研究仍有待加强。


【发明内容】

[0005] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的 一个目的在于提出一种利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方法，其能够准 确测定安立生坦及其制剂含量，并且分离度高、专属性强。
[0006] 安立生坦及其制剂含量的分析方法，其难度在于安立生坦是一个难溶于水的物 质，在其原料合成过程中中间体和产生的杂质比较多、W及制剂中易产生降解杂质，而且各 个杂质的性质与安立生坦的比较相近，难于分离。本发明的发明人对安立生坦及其制剂含 量的分析方法进行了大量研究，特别的，发明人通过实验比较了在不同的色谱条件下，安立 生坦中的杂质与安立生坦的分离色谱图。
[0007] 其中，色谱条件中，流动相（1) 体积分数为0.05%?0. 10%磯酸溶液（用H己 胺调抑值至3. 0?4. 0)为流动相A，W甲醇为流动相B的梯度洗脱条件，测定样品的色谱 图；
[0008] 色谱条件中，流动相（2) ; W 15?25mmol/L磯酸氨二轴缓冲液（含0. Ol % (质量 体积比）H己胺，用磯酸调抑至6. 0?6. 9)为流动相A，W己膳为流动相B的梯度洗脱条 件，测定样品的色谱图。
[0009] 本发明流动相A的组成为：在15?25mmol/L磯酸氨二轴缓冲液中，添加0. 01% 的H己胺，然后用磯酸调抑至6. 0?6. 9,即得本发明所述流动相A。
[0010] 结果；发现在流动相（1)的样品色谱图中，安立生坦未洗脱出，且基线不平；而在 流动相（2)的样品色谱图中，基线平稳，各杂质与安立生坦完全分离，峰型对称，响应高，具 体见图3。
[0011] 因此，本发明选择的流动相为：W 15?25mmol/L磯酸氨二轴缓冲液（含0.01% H己胺，用磯酸调抑至6. 0?6. 9)为流动相A，W己膳为流动相B ;进行梯度洗脱。
[0012] 因而，本发明提供了一种利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方 法。根据本发明的实施例，该高效液相色谱分析方法的色谱条件采用十八焼基娃焼键合 娃胶柱为色谱柱，配备紫外检测器；流动相由流动相A、流动相B组成，采用浓度为15? 25mmol/L的磯酸氨二轴缓冲液（含0. Ol %H己胺，用磯酸调抑至6. 0?6. 9)作为流动相 A 及采用己膳作为流动相B ;洗脱方式采用梯度洗脱。根据本发明的实施例，本发明所述 梯度洗脱的条件，包括流动相比例、洗脱时间如下：
[0013]

【权利要求】
1. 一种利用高效液相色谱法分析安立生坦及其制剂含量的方法，其特征在于， 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，配备紫外检测器； 流动相由流动相A、流动相B组成， 采用15?25mmol/L磷酸氢二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述15?25mmol/L磷酸 氢二钠缓冲液含有〇.Ol%三乙胺，并用磷酸调pH至6.O?6. 9 ; 米用乙腈作为流动相B; 洗脱方式采用梯度洗脱。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为263nm。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为28?32摄氏度。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 取安立生坦原料药或制剂粉末，用乙腈超声溶解，离心，配制成安立生坦浓度为 0· 5mg/ml的供试品溶液； (2) 色谱条件：采用十八烷基键合硅胶柱作为色谱柱，配备紫外检测器；流动相由流动 相A、流动相B组成，采用15?25mmol/L磷酸氢二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述15? 25mmol/L磷酸氢二钠缓冲液含有0. 01 %三乙胺，并用磷酸调pH至6. 0?6. 9,采用乙腈作 为流动相B，柱温为28?32°C、流速为0. 8?I. 2ml/min、检测波长为263nm，进行梯度洗 脱； (3) 取所述供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算， 得到样品中安立生坦及其制剂的含量。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为:
其中，柱温为28?32摄氏度，检测波长为263nm，流速为0. 8?1. 2毫升/分钟，进样 体积为20μL。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配备紫外检测器，流动相由流动相A、流动相B组成，采用浓度为20mmol/L的磷酸氢 二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述浓度为20mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸调PH至6. 5,采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：
其中，柱温为30摄氏度，检测波长为263nm，流速为I. O毫升/分钟，进样体积为20μL。
7. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配备紫外检测器，流动相由流动相A、流动相B组成，采用浓度为25mmol/L的磷酸氢 二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述浓度为25mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸调PH至6. 0,采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：
其中，柱温为32摄氏度，检测波长为263nm，流速为1. 2毫升/分钟，进样体积为20μL。
8. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配备紫外检测器；流动相由流动相A、流动相B组成，采用浓度为15mmol/L的磷酸氢 二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述浓度为15mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸调PH至6. 9,采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：

其中，柱温为28摄氏度，检测波长为263nm，流速为0.8毫升/分钟，进样体积为20μL。
9. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4. 6mm，5μm的Waters XTera C18柱，配备紫外检测器；流动相由流动相A、流动相B组成，采用浓度为20mmol/L的磷酸氢 二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述浓度为20mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液含0. 01 %三乙 胺，并用磷酸调PH至6. 5,采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为:
其中，柱温为30摄氏度，检测波长为263nm，流速为I.0毫升/分钟，进样体积为20μL。
10. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用150mmX4.6mm，5ym的Waters XTeraC18柱，配备紫外检测器；流动相由流动相A、流动相B组成，采用浓度为20mmol/ L的磷酸氢二钠缓冲液作为流动相A，其中，所述浓度为20mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液含 0. 01 %三乙胺，并用磷酸调pH至6. 5,采用乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱 条件为：

其中，柱温为30摄氏度，检测波长为263nm，流速为I.O毫升/分钟，进样体积为20μL。
【文档编号】G01N30/88GK104237432SQ201410426199
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月27日 优先权日:2014年8月27日
【发明者】李莉娥, 王学海, 许勇, 黄怡, 吴迪, 范昭泽, 黄璐, 黄翔, 乐洋, 杨仲文, 刘亚璇, 袁李芳, 肖强, 田华, 唐静, 周文, 杨菁, 张毅 申请人:人福医药集团股份公司