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一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法
【专利摘要】本发明提供了一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法，包括以下检测步骤：取鼻咽部渗液；把鼻咽部渗液置于预装有缓冲液的取样瓶中，混匀；在样本瓶内顺序加入试剂A1ml，试剂B1ml；混匀，2分钟内观察颜色变化，与比色板比对检测结果；本发明简单、快速、可检测出的最低游离亚铁原卟啉的浓度可达5ng/ml，灵敏度极高。
【专利说明】一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方 法。

【背景技术】
[0002] 线粒体是人体细胞中最重要的细胞器，是细胞的"动力工厂"。对受损鼻咽部粘膜 细胞线粒体的检测包括对线粒体渗透转换孔（mitochon2dria permeability transition pore，MPTP)的检测、膜磷脂的检测、膜电位的检测、2mtDNA损伤检测、细胞内钙离子浓度检 测等。此类检测操作十分复杂，需要精密的仪器设备，一般实验室很难完成，使鼻咽部粘膜 细胞线粒体损伤检测受到极大限制。在如上高难度检测之前，使用一种操作简单、成本低廉 的方法，对鼻咽部粘膜细胞线粒体是否损伤进行初步筛查，会对鼻咽部粘膜细胞线粒体是 否损伤起到启示作用，对是否需要进一步进行如上高难度检测起到指示作用。因此，研究发 明一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤检测技术具有很重要的意义。


【发明内容】

[0003] 为了解决现有技术中检测鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的方法中操作复杂、设备昂 贵、难以实施的问题，本发明提供了一种检测鼻咽部渗液细胞游离亚铁原卟啉、进而了解鼻 咽部粘膜细胞线粒体有否损伤的检测方法，本发明提供的方法简单易行，成本低廉，可快速 地筛查鼻咽部粘膜细胞线粒体有否损伤。
[0004] 本发明提供的鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法，包括以下检测步骤： 1)取鼻咽部渗液0. 5-1 ml ； 2)把鼻咽部渗液置于预装有缓冲液的取样瓶中，混匀；样本瓶内预装有醋酸缓冲液，缓 冲液的量为2ml，混匀，得样本液；优选的，醋酸缓冲液PH值为4. 5 ; 3)在样本瓶内顺序加入试剂A lml，试剂B lml ;混匀，2分钟内观察颜色变化，与比色板 比对检测结果； 所述试剂A为二（4. 二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；优选的，二（4. 二 甲氨基苯基）甲烷溶液浓度为0. 002mol/L ； 所述试剂B为过氧化氢溶液；优选的，过氧化氢溶液为1. 5%。
[0005] 显蓝色或深蓝色，可判定样本中含有游离亚铁原卟啉，线粒体有损伤。
[0006] 在某些因素的作用下，鼻咽部粘膜细胞稳态失调，出现能量代谢重编程。鼻咽部粘 膜细胞代谢出现瓦博格氏效应，导致细胞内低氧和还原态微环境，激活氧感受器和缺氧信 号传导通路，促使缺氧特异性转录因子-低氧诱导因子和第二信使-活性氧族活性增高， 改变细胞色素等细胞蛋白（HP)的极性量值，使位居蛋白疏水核中的细胞游离亚铁原卟啉 (Cells Free Ferrous Protoporphyrin )析出。细胞游离亚铁原卩卜啉催生多种自由基，引起 细胞膜脂质、脂蛋白、细胞骨架、DNA等的氧化损伤，可使线粒体出现线粒体单价电子渗漏 (univalent leak);胞内Ca2+超载，触发线粒体摄取Ca2+并使Ca2+在线粒体内积聚；抑制
【权利要求】
1. 一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法，包括以下检测步骤： 1)取鼻咽部渗液0. 5-1 ml ； 2)把鼻咽部渗液置于预装有缓冲液的取样瓶中，混匀；预装的缓冲液为醋酸缓冲液，缓 冲液的量为2ml，混匀，得样本液； 3)在样本瓶内顺序加入试剂A lml，试剂B lml ;混匀，2分钟内观察颜色变化，与比色板 比对检测结果； 所述试剂A为二（4. 二甲氨基苯基）甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液； 所述试剂B为过氧化氢溶液。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的醋酸缓冲液PH值为4. 5。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的二（4. 二甲氨基苯基）甲烷溶 液浓度为0. 002mol/L。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的过氧化氢溶液的浓缩为1. 5%。
【文档编号】G01N21/78GK104048961SQ201410329563
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年7月11日 优先权日:2014年7月11日
【发明者】温鑫, 崔子伦 申请人:青岛贝尔奥生物科技有限公司