一种检测食醋中所含氨基酸的方法-山东亚星游戏官网机床有限公司

专利名称：一种检测食醋中所含氨基酸的方法
技术领域：
本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种检测食醋中所含氨基酸的方法，更具体的涉及蒸馏法、固相萃取柱提取净化与离子色谱-电化学检测器联用技术检测食醋中氨基酸含量的方法。
背景技术：
食醋作为一种调味品，在日常生活中为人们所必须；随着食醋所具有的诸如消除疲劳、抗衰老以及软化血管，降血脂，降低胆固醇等保健作用的凸显，食醋在生活中也显得越来越重要。醋中含有0.05% -3%的蛋白质，含氨基酸18种，其中人体必需的8种氨基酸均具备。醋的味道鲜美，醋味圆润、柔和，这些均是氨基酸的功劳。多种氨基酸混合产生醋的美味和有机酸的酸味混合产生醋的芳香。食醋按生产工艺分有酿造食醋与配制食醋:(I)、酿造食醋在GB18187-2000国家标准中定义是单独或混合使用各种含有淀粉、糖的物料或酒精，经微生物发酵酿制而成的液体调味品；其发酵工艺分为两类:一类是固态发酵食醋，另一类是液态发酵食醋；(2)、配制食醋在SB10337-2000商业部标准中定义是以酿造食醋为主体，与冰乙酸、食品添加剂等混合配制而成的调味食醋，且配制食醋中酿造食醋的比例(以乙酸计)不得少于50%。由于酿造食醋周期长、成本高，加之我国的标准比较落后，使得一些不法之徒有机可乘，用食用冰醋酸勾兑成配制食醋用来冒充酿造食醋以牟取暴利，更可恨的是工业冰醋酸勾兑成人工醋(简称合成醋)这种劣质食醋不仅无营养价值，而且严重�：ι硖褰】�。根据现行的国家标准，酿造食醋的理化指标主要有:总酸(以乙酸计)、不挥发酸(以乳酸计)、可溶性无盐固形物，无法制约冰醋酸勾兑成配制食醋和人工合成醋。使制假者用冰醋酸兑水稀释后加入少量酿造食醋、焦糖色素、添加剂等就能达到酿造食醋的理化指标标准，披上“合格”的外衣进行销售，给食品监管带来困难。现有检测方法一般通过柱前或柱后对氨基酸衍生后采用高效液相色谱对进行测定，这种方法衍生试剂费用较高，试验操作较复杂，稳定性差。采用离子色谱法进行测定氨基酸一般通过大量的稀释样品来进行测定，灵敏度较低，一些微量的氨基酸无法进行检测。因此急需一种检测方法来准确定量检出酿造食醋中18种氨基酸的含量特征指标，用以鉴别酿造食醋与配制食醋及合成醋，从而规范食醋行业，使其健康发展，确保食醋质量安全。

发明内容
为了鉴别酿造食醋与配制食醋及合成醋，本发明的目的在于公开了一种分析检测食醋中18种氨基酸的方法，具体来说提供了一种利用蒸馏法浓缩富集、固相萃取柱提取净化与离子色谱-电化学检测器联用技术检测食醋中氨基酸化合物的方法，以对食醋中氨基酸进行定性和定量分析。本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种检测食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步骤:(I)、对食醋待测样品用水蒸气蒸馏提�。ゴ庋分械幕臃⑺幔⒍园被峤辛伺ㄋ醺患�(2)、对步骤(I)的提取物用固相萃取柱进行提取净化；(3)、对步骤(2)的净化产物用离子色谱-电化学检测器进行检测，经过离子色谱分析后得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图；(4)、配备18种氨基酸标准溶液，经过离子色谱分析后，得到18种氨基酸标准溶液色谱图，所述离子色谱分析的条件与步骤(3)中的离子色谱分析的条件相同；(5)、将步骤(3)和步骤(4)分别得到的色谱图进行对照，即得食醋试样中所含有氨基酸的种类；本技术方案中18种氨基酸标准溶液的配制过程为:分别称取18种氨基酸单标样(0.1g)用超纯水配制成l OOOymol/L标准储备溶液；分别量取18种氨基酸标准储备溶液
5.0mL,用超纯水定容至IOOmL,摇勻备用，配制成18种氨基酸标准溶液(50 μ mol/L)。上述技术方案所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其中，步骤(I)的具体过程为:吸取食醋试样2mL进行水蒸汽蒸馏，当接收液到达ISOmL时，结束蒸馏，用超纯水定容至IOmL，得到提取物。上述技术方案所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其中，步骤(2)的具体过程为:取I 2mL步骤(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去样品中的糖醇化合物，弃掉洗涤液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脱小柱，整个固相萃取过程流速不超过lmL/min ;洗脱液于50°C下用氮气吹干，然后用去离子水溶解并稀释，得到供离子色谱测定的净化产物。上述技术方案所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其中，步骤(3)的具体过程为:对步骤(2)得到的净化产物离子色谱-电化学检测器联用技术进行检测，得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图；其中离子色谱条件为色谱柱=Amino PacPA-10 (2 X 250mm)；进样量:25 μ L ;分析时间:52min。上述技术方案所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其中，所述步骤(3)中离子色谱的梯度淋洗液程序为:流动相流速为0.25ml/min，A通道流动相为去离子水，B通道流动相为250mmol/L氢氧化钠溶液，C通道流动相为lmol/L乙酸钠溶液；从O 6min，A通道流动相比例占88 %，B通道流动相比例占12 %，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5 ;从6min 12.1Omin, A通道流动相比例从88%逐渐下降为68.0%，B通道流动相比例从12%逐渐上升为32.0%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5 ；12.10 16.0min, A通道流动相比例占68%，B通道流动相比例占32%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为8 ;从16.0Omin 24.0Omin, A通道流动相比例从68%逐渐下降为36.0%，B通道流动相比例从32%逐渐下降为24.0%，C通道流动相比例逐渐上升为40%，梯度曲线为5 ;从24.00 39.00min,A通道流动相比例占36 %，B通道流动相比例占24%，C通道流动相比例占40 %，梯度曲线为8 ;从39.00 39.1Omin, A通道流动相比例从36%下降为20.0%，B通道流动相比例从24.0%逐渐上升为80.0%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5 ;从39.10 41.1Omin, A通道流动相比例^ 20%, B通道流动相比例^ 80%, C通道流动相比例占0，梯度曲线为8;从41.10 41.20min, A通道流动相比例从20%上升为88.0%，B通道流动相比例从80.0%逐渐下降为12.0%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5;从41.20 52.0min，A通道流动相比例占88%，B通道流动相比例占12%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5。本发明具有以下有益效果:1、本发明首次将蒸馏法提取、强阳离子固相萃取柱(SCX)进行净化与离子色谱-电化学检测器相结合的方法，建立了高效、准确、灵敏的检测食醋中18种氨基酸的分析方法。2、与传统的浓缩技术相比，本发明采用水蒸气蒸馏法富集食醋中部分微量氨基酸并除去食醋待测样品中的挥发酸，使得最终的检测结果更加准确；而经传统的浓缩技术处理的样品中仍然会有有大量的乙酸和糖类物质对氨基酸的结果产生干扰。3、本发明采用强阳离子固相萃取柱净化提�。行岣呤炒字邪被峒觳夥椒ǖ闹叵中�、灵敏度和回收率；另外采用电化学检测器-离子色谱，该方法灵敏度高，成本低，克服了以往分析方法中的诸多不足。4、本发明公开的食醋中氨基酸的方法开发和应用，将有利于规范食醋企业生产、提高产品质量安全，同时为鉴别酿造食醋、配制食醋及合成醋做了初步研究。因此，本发明对于促进我国食醋行业发展和保护消费者利益等方面具有重要的现实意义。

:1、图1为18种氨基酸标准溶液色谱图。2、图2为食醋试样中所含氨基酸的色谱图。
具体实施方式
:为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明的检测方法作进一步的说明。实施例1:一种检测食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步骤:(I)、对市场购买的食醋待测样品用水蒸气蒸馏提�。ゴ庋分械幕臃⑺幔⒍园被峤辛伺ㄋ醺患痪咛宀街栉�:吸取食醋待测样品2mL进行水蒸汽蒸馏，当接收液到达180ml时，结束蒸馏，用超纯水定容至10mL，得到提取物；(2)、对步骤⑴的提取物用固相萃取柱进行提取净化，具体步骤为:取I 2mL步骤(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去样品中的糖醇化合物，弃掉洗涤液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脱小柱，整个固相萃取过程流速不超过lmL/min ;洗脱液于50°C下用氮气吹干，然后用去离子水溶解并稀释至一定体积，得到供离子色谱测定的净化产物；(3)、对步骤(2)的净化产物用离子色谱-电化学检测器进行检测，得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图，具体步骤为:对步骤(2)得到的净化产物离子色谱-电化学检测器联用技术进行检测，其中离子色谱条件为色谱柱=Amino Pac PA-10 (2 X 250mm);进样量:25 μ L ;分析时间:52min ;所述离子色谱的梯度淋洗液程序如表I所示；得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图，结果如图2所示，图2中在不同时间出现的1-14号波峰分别代表食醋待测样品中所含有的14种不同的氨基酸；
表I 梯度淋洗液设定程序

权利要求
1.一种检测食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步骤: (1)、对食醋待测样品用水蒸气蒸馏提�。ゴ庋分械幕臃⑺幔⒍园被峤辛伺ㄋ醺患� (2)、对步骤(I)的提取物用固相萃取柱进行提取净化； (3)、对步骤(2)的净化产物用离子色谱-电化学检测器进行检测，经过离子色谱分析后得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图； (4)、配备18种氨基酸标准溶液，经过离子色谱分析后，得到18种氨基酸标准溶液色谱图，所述离子色谱分析的条件与步骤(3)中的离子色谱分析的条件相同； (5)、将步骤(3)和步骤(4)分别得到的色谱图进行对照，即得食醋试样中所含有氨基酸的种类。
2.根据权利要求1所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步骤(I)的具体过程为:吸取食醋试样2mL进行水蒸汽蒸馏，当接收液到达180ml时，结束蒸馏，用超纯水定容至10mL，得到提取物。
3.根据权利要求1所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步骤(2)的具体过程为:取I 2mL步骤(I)的提取物放入固相萃取柱中，用15 20mL0.02%的甲酸溶液淋洗小柱，除去样品中的糖醇化合物，弃掉洗涤液；用lOmLlmol/L氨水溶液洗脱小柱，整个固相萃取过程流速不超过lmL/min ;洗脱液于50°C下用氮气吹干，然后用去离子水溶解并稀释，得到供离子色谱测定的净化产物。
4.根据权利要求1所述的一种检测食醋中所含氨基酸的方法，其特征在于，步骤(3)的具体过程为:对步骤(2)得到的净化产物离子色谱-电化学检测器进行检测，得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图；其中离子色谱条件为色谱柱=Amino Pac PA-1O (2 X 250mm);进样量:25μ L ;分析时间:52min。
5.根据权利要求4所述的一种检测食醋所含氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)中离子色谱的梯度淋洗液程序为:流动相流速为0.25ml/min, A通道流动相为去离子水，B通道流动相为250mmol/L氢氧化钠溶液，C通道流动相为lmol/L乙酸钠溶液；从0 6min，A通道流动相比例占88%，B通道流动相比例占12%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为.5 ;从6min 12.1Omin, A通道流动相比例从88%逐渐下降为68.0%，B通道流动相比例从12%逐渐上升为32.0%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5 ；12.10 16.0min, A通道流动相比例占68%，B通道流动相比例占32%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为8 ;从.16.0Omin 24.0Omin, A通道流动相比例从68%逐渐下降为36.0%，B通道流动相比例从.32 %逐渐下降为24.0 %，C通道流动相比例逐渐上升为40 %，梯度曲线为5 ;从24.00 .39.0Omin7A通道流动相比例占36 %，B通道流动相比例占24%，C通道流动相比例占40 %，梯度曲线为8 ;从39.00 39.1Omin, A通道流动相比例从36%下降为20.0%，B通道流动相比例从24.0 %逐渐上升为80.0%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5 ;从39.10 .41.1Omin, A通道流动相比例^ 20%, B通道流动相比例^ 80%, C通道流动相比例占0，梯度曲线为8 ;从41.10 41.20min, A通道流动相比例从20%上升为88.0%，B通道流动相比例从80.0%逐渐下降为12.0%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5 ;从41.20 .52.0min，A通道流动相比例占88%，B通道流动相比例占12%，C通道流动相比例占0，梯度曲线为5。
全文摘要
本发明一种检测食醋中所含氨基酸的方法，包括下述步骤(1)对食醋待测样品用水蒸气蒸馏提�。�(2)对步骤(1)的提取物用固相萃取柱进行提取净化；(3)对步骤(2)的净化产物用离子色谱-电化学检测器进行检测，得到食醋试样中所含氨基酸的色谱图；(4)配备18种氨基酸标准溶液，经过离子色谱分析后，得到18种氨基酸标准溶液色谱图；(5)将步骤(3)和步骤(4)分别得到的色谱图进行对照，即得食醋试样中所含有氨基酸的种类。本发明具有将蒸馏法提取、强阳离子固相萃取柱(SCX)进行净化与离子色谱-电化学检测器相结合的方法，建立了高效、准确、灵敏的检测食醋中18种氨基酸的分析方法的优点。
文档编号G01N30/88GK103197022SQ20131014541
公开日2013年7月10日申请日期2013年4月25日优先权日2013年4月25日
发明者梁宝爱, 张素娟, 姚春孝, 武向勇, 刘玉玲, 孙丽萍, 贾策, 赵海霞申请人:山西省食品质量安全监督检验研究所

亚星游戏官网-www.yaxin868.com

一种检测食醋中所含氨基酸的方法