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一种多色荧光免疫层析蛋白芯片的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种多色免疫层析蛋白芯片，属于免疫诊断【技术领域】。该芯片包括粘性底板、样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫；所述样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫以适当重叠关系置于粘性底板上；所述结合垫有若干种不同检测探针-荧光物质和示踪物-质控探针结合物；所述分析膜上有检测区，检测区包括若干检测矩阵，每一检测矩阵包含若干种不同检测探针和质控探针，每一检测探针特异对应一种被检靶标，每一质控探针特异对应一种被检靶标质控流程。本发明将蛋白芯片、免疫层析和多色荧光技术相互融合，实现了增加检测矩阵面积，提高检测精密度和降低漏诊概率的需求。
【专利说明】一种多色荧光免疫层析蛋白芯片

【技术领域】
[0001]本发明属于免疫诊断【技术领域】，尤其是涉及一种多色荧光免疫层析蛋白芯片，将免疫层析技术、蛋白芯片和多色荧光技术相互融合，实现增加检测矩阵面积，提高检测精密度和降低漏诊概率的需求。

【背景技术】
[0002]免疫层析法是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金、免疫酶染色或荧光可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。就现有技术来讲，免疫层析技术是一种较成熟、简便、快捷的现场检测手段，但其通常只能对一种靶标进行分析，无法实现高通量检测。
[0003]免疫层析蛋白芯片技术在申请号为201010257719.5等专利中有详细的描述，可以克服免疫层析技术无法高通量检测以及芯片技术操作复杂无法现场使用的缺点。能够实现一次加样同步检测多种目标物。当样品加入样品垫位置，经过样品垫的过滤和缓冲作用进入分析膜区域，相应的抗原与分析膜与样品垫交接处相应的特异性免疫荧光微球结合后，沿着分析膜向前层析移动，各免疫荧光微球移动至膜上固定有抗体的不同区域后各自发生特异性结合，在不同的区域呈现出与样本中检测物浓度相关的不同颜色、光、电、磁信号的强度。特定波长激发下检测荧光强度即可根据标准曲线定量计算得需分析指标的浓度值。
[0004]传统的免疫层析蛋白芯片技术是在分析膜上不同的区域固定不同的抗体，为实现数十种不同指标的检测，只能将结合抗体在分析膜上以很小的面积区域固定，该区域被称为检测矩阵。而在样品层析时，难免会出现浓度不均匀的现象，即需要和某一特定检测矩阵特异性结合的组分的主浓度峰并未通过相对应的检测矩阵，因为检测矩阵面积太小。这样会导致试纸条的精密度变差，甚至引起漏检。故在实际开发中，传统的免疫层析芯片上难以支撑足够多指标的同时检测。


【发明内容】

[0005]为了克服传统的免疫层析蛋白芯片技术难以支撑足够多指标的同时检测的不足，本发明提供一种免疫层析蛋白多色荧光芯片，该免疫层析蛋白多色荧光芯片采用免疫层析蛋白多色荧光芯片技术，该芯片大幅增加检测矩阵的面积，降低上述因层析的不均一性引起的精密度变差以及漏诊的概率，更好的符合了多指标同时准确检测的需求。
[0006]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:在粘性底衬上，样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫按照适当的重叠关系固定。
[0007]其中，粘性低衬是单面涂有压力敏感胶的硬质物质；
其中，结合垫是具有较大床体积且微观结构匀称的物质，结合垫中有若干种检测结合物和质控结合物，检测结合物由若干种荧光物质和检测探针连接而成，并与被检靶标特异性的一一对应，质控结合物由示踪物和质控探针连接而成，质控层析过程正常与否；
其中，分析膜是微观结构匀称的物质，分析膜设有一个检测区，每个检测区包括若干检测矩阵，每个检测矩阵包含三种及三种以上不同的检测探针，并且每个检测矩阵所含的检测探针都不相同，在同一检测矩阵(本芯片检测矩阵可以和质控矩阵可以相互重叠)中包含若干种的检测探针或质控探针，检测矩阵的每一种检测探针一一对应被检靶标中每一种特异性检测，检测矩阵的质控每一种质控探针一一对应被检靶标每一种质控流程；
其中，吸水垫是具有较大床体积的物质；
其中，结合垫中的检测结合物含有的不同荧光物质和不同的检测探针，一种特定的荧光物质只和一种特定的检测探针结合，并且只针对性的和每个检测矩阵中的某一种特定的检测探针发生特异性反应(如有结合垫上有六种检测结合物:检测探针『荧光八、检测探针13-突光8、检测探针突光 ?:、检测探针(1-突光八、检测探针6-突光8、检测探针突光〇，分析膜上有两个检测矩阵，检测矩阵I有123检测矩阵II有456，共有六种检测探针，共有六个检测探针，则检测探针3 -荧光八只针对检测矩阵I中检测探针1结合，检测探针6 -荧光8只针对检测矩阵I的检测探针2结合，检测探针0 -荧光只针对检测矩阵I中的检测探针3结合；检测探针(1 -荧光八只针对检测矩阵2中检测探针II结合，检测探针0 -荧光8只针对检测矩阵II的检测探针2结合，检测探针？-荧光只针对检测矩阵II中的检测探针3结合),并通过仪器对对发生的反应进行检测。
[0008]本发明的有益效果是:本发明免疫层析蛋白多色荧光芯片实现方式包括夹心模式、间接模式和竞争模式等，能同时在同一检测矩阵中实现多种检测指标，大幅增加检测矩阵的面积，降低了因层析的不均一性引起的精密度变差以及漏诊的概率，更好的符合了多指标同时准确检测的需求，提高检测准确率，节约成本。
[0009]

【专利附图】

【附图说明】
[0010]下面结合附图和实施例对本发明进一步说明图1是本发明的整体示意图图中1粘性底衬，2样品垫，3结合垫，4分析膜，5吸水垫，6检测矩阵

【具体实施方式】
[0011]在图1中在粘性底衬1上，样品垫2、结合垫3、分析膜4、吸水垫5按照适当的重叠关系固定。
[0012]其中，粘性低衬1是单面涂有压力敏感胶的硬质物质；
其中，结合垫3是具有较大床体积且微观结构匀称的物质，结合垫2中有若干种检测结合物和质控结合物，检测结合物由若干种荧光物质和检测探针连接而成，并与被检靶标特异性的一一对应，质控结合物由示踪物和质控探针连接而成，质控层析过程正常与否；其中，分析膜4是微观结构匀称的物质，分析膜4设有一个检测区，每个检测区包括若干检测矩阵6，每个检测矩阵包含三种及三种以上不同的检测探针，并且每个检测矩阵所含的检测探针都不相同，在同一检测矩阵(本芯片检测矩阵可以和质控矩阵可以相互重叠)中包含若干种的检测探针或质控探针，检测矩阵6的每一种检测探针对应被检祀标中每一种特异性检测，检测矩阵6的质控每一种质控探针一一对应被检靶标每一种质控流程；
其中，吸水垫5是具有较大床体积的物质；
其中，结合垫3中的检测结合物含有的不同荧光物质和不同的检测探针，一种特定的荧光物质只和一种特定的检测探针结合，并且只针对性的和每个检测矩阵5中的某一种特定的检测探针发生特异性反应(如有结合垫上有六种检测结合物:检测探针『荧光八、检测探针卜突光8、检测探针突光 ?:、检测探针(1-突光八、检测探针6-突光8、检测探针荧光I分析膜上有两个检测矩阵，检测矩阵I有123检测矩阵II有456，共有六种检测探针，共有六个检测探针，则检测探针3 -荧光八只针对检测矩阵I中检测探针1结合，检测探针6 -荧光8只针对检测矩阵I的检测探针2结合，检测探针0 -荧光只针对检测矩阵I中的检测探针3结合；检测探针(1 -荧光八只针对检测矩阵2中检测探针II结合，检测探针6 -荧光8只针对检测矩阵II的检测探针2结合，检测探针？-荧光只针对检测矩阵II中的检测探针3结合),并通过仪器对对发生的反应进行检测。
[0013]本发明进行生物靶标检测的方法如下:
4.添加样品:将液体样品或者经过处理的液体样品滴加至本发明免疫层析芯片的样品塾2上；
5.层析反应:静置数分钟等待层析反应完成，层析过程中，样品垫2中的检测结合物、被检靶标和分析膜4的检测矩阵中的若干种检测探针发生特异性的免疫反应，在分析膜的检测矩阵上发生荧光物质结合量的变化，该结合量直接反映了被检靶标的有无或者多少；
6.结果判读:本发明免疫层析芯片由于被检靶标反应在分析膜的检测矩阵中位置明确固定，因而通过仪器对示踪物的信号进行判读，即可实现:了解层析过程是否正常进行和被检靶标的定性定量检测和分析。
【权利要求】
1.一种免疫层析蛋白多色荧光芯片，在粘性底衬上，样品垫、合垫、分析膜、吸水垫按照适当的重叠关系固定，其特征是:该芯片分析膜设有一个检测区，每个检测区包括若干检测矩阵，在同一检测矩阵(检测矩阵可以和质控矩阵相互重叠)中包含若干种的检测探针和质控探针，检测区的每一种检测探针一一对应被检靶标中每一种特异性检测，检测区的每一种质控探针 对应被检IE标每一种质控流程；该芯片结合垫中有若干种检测结合物和质控结合物，检测结合物由若干种荧光物质和检测探针连接而成，并与被检靶标特异性的一一对应，质控结合物由示踪物和质控探针连接而成，质控层析过程常与否。
2.根据权利要求1所述的芯片，其特征是:分析膜是微观结构匀称的物质，分析膜设有一个检测区，每个检测区包括若干检测矩阵，在同一检测矩阵(检测矩阵可以和质控矩阵可以相互重叠)中包含若干种的检测探针和质控探针，检测区的每一种检测探针一一对应被检靶标中每一种特异性检测,检测区的质控每一种质控探针--对应被检靶标每一种质控流程。
3.根据权利要求1所述的芯片，其特征是:结合垫中有若干种检测结合物和质控结合物，检测结合物由若干种荧光物质和检测探针连接而成，并与被检靶标特异性的一一对应，质控结合物由示踪物和质控探针连接而成，质控层析过程常与否。
4.根据权利要求1所述的芯片，其特征是:结合垫中的检测结合物含有的不同荧光物质和不同的检测探针，一种特定的荧光物质只和一种特定的检测探针结合，并且只针对性的和每个检测矩阵中的某一种特定的检测探针发生特异性反应。
5.根据权利要求1所述的芯片，其特征是:实现方式包括夹心模式、间接模式和竞争模式等，能同时在同一检测矩阵中实现多种检测指标。
【文档编号】G01N33/558GK104280544SQ201410151364
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年4月16日 优先权日:2014年4月16日
【发明者】苏恩本, 金晶, 钱瑾, 李洁, 许行尚 申请人:南京基蛋生物科技有限公司