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一种cetp抑制剂的分离检测方法
【专利摘要】一种分离检测安塞曲匹及其异构体的方法，用CHIRALPAK?AD-H手性色谱柱(250*4.6mm)为分离色谱柱，以正己烷：异丙醇＝95:5(V/V)为流动相，可以将安塞曲匹与其3个光学异构体进行基线分离，可以有效控制安塞曲匹异构体杂质以及非对映异构体的含量。本发明的方法能简单、快速、准确的分离检测出安塞曲匹及其光学异构体。
【专利说明】—种CETP抑制剂的分罔检测方法

【技术领域】
[0001]本申请涉及药物化学领域，具体涉及合成抑制胆固醇酯转移蛋白(CETP)的化合物的方法。

【背景技术】
[0002]中国专利申请CN 200580022618.7公开一系列胆固醇酯转移蛋白抑制剂(CETP)，其中安塞曲匹，可以增加高密度脂蛋白(HDL)胆固醇和载脂蛋白Al，并减少低密度脂蛋白(LDL)胆固醇和载脂蛋白B，可以潜在治疗血脂异常并预防动脉粥样硬化。安塞曲匹其化学名称为(4S, 5R)_5_[3，5-双(二氟甲基)苯基]-3-{[4' _氟-5 ' _异丙基-2' _甲氧基-4-(三氟甲基)联苯基-2-基]甲基}-4_甲基-1，3-噁唑烷-2-酮，其化学结构如式
(I)所示:
[0003]
Yr

r\-CF3

p3c(I)0
[0004]安塞曲匹的分子中存在2个手性中心，因此，存在一个对映异构体杂质以及两个非对映异构体。在生产安塞曲匹的过程中需要进行质量控制，但目前，《美国药典》USP、《欧洲药典》EP及《中国药典》Ch.P.均没有收载安塞曲匹，也未查到有关文献报道安塞曲匹及其异构体的分离检测方法。为了更好更准确的控制产品中异构体的含量，保证原料药以及制剂产品的质量，发明人开发了适合于安塞曲匹原料药的异构体含量测定的分析方法。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出安塞曲匹及其异构体杂质。


【发明内容】

[0005]目前，未发现对安塞曲匹光学异构体分析方法的报道，我们经过反复试验以及研究，用CHIRALPAK AD-H手性色谱柱(250*4.6mm)为分离色谱柱，以正己烷:异丙醇=95:5(V/V)为流动相，可以将安塞曲匹与其3个光学异构体进行基线分离，可以有效控制安塞曲匹异构体杂质以及非对映异构体的的含量。本发明的方法能简单、快速、准确的分离检测出安塞曲匹及其光学异构体。
[0006]术语定义
[0007]术语“安塞曲匹”是指(4S，5R)-5_[3，5-双(三氟甲基)苯基]-3-{[4'-氟-5'-异丙基-2'-甲氧基-4-(三氟甲基)联苯基-2-基]甲基}-4_甲基-1，3-噁唑烷-2-酮。
[0008]在本发明上下文中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现5%或10%等的差异。
[0009]发明详述
[0010]一种分离检测安塞曲匹及其异构体的方法，其特征在于，用填料为涂覆直链淀粉类或键合纤维素类的手性色谱柱为分离色谱柱，以低级烷烃和/或醇类溶剂为流动相。
[0011 ] 在一些实施例中，所述的手性色谱柱为CHIRALPAK AD_H。
[0012]在一些实施例中，所述的低级烷烃为正己烷、环己烷、正戊烷、正庚烷的一种或几种。
[0013]在一些实施例中，所述的醇类溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇的一种或几种。
[0014]在一些实施例中，所述低级烷烃与醇类溶剂的体积比为100:0至80:20，在某些实施例中，低级烷烃与醇类溶剂的体积比为95:5。
[0015]在一些实施例中，所述的流动相为正己烷和异丙醇，其体积比为95:5。
[0016]进一步地，为了实现本发明的分离检测，本发明采用以下检测仪器及检测条件:
[0017]色谱柱为CHIRALPAK AD-H。
[0018]检测器为DAD检测器，检测波长230nm-270nm，优选250nm。
[0019]流速为0.3-1.lml/min,优先 0.6mT,/miη。
[0020]柱温为20-40 V，优先 30 V。
[0021]进样量为2-30 μ L，优选15 μ L。
[0022]运行时间为80分钟以内。
[0023]供试液配制:用稀释剂将供试品配制成0.3-5mg/ml,优选lmg/ml的溶液。
[0024]在一些实施例中，安塞曲匹及其异构体的分离检测包括以下步骤:
[0025]a)取一定量的安塞曲匹及其异构体混合物，用正庚烷作为稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，
[0026]b)取供试品溶液，按如下的条件进行高效液相色谱分析:
[0027]以CHIRALPAK AD-H (4.6x 250mm)为分离柱；紫外检测波长为 250nm ；
[0028]流动相为正己烷:异丙醇=95:5(V/V)；
[0029]柱温30°C;
[0030]进样体积为15yL;
[0031]流速0.6ml/min ；
[0032]c)记录色谱图。
[0033]本发明所述的分离检测方法，安塞曲匹出峰位置保留时间(RT)约为10.2min，其对映异构体RT约为8.4min，其非对映异构体的RT约为9.0min和约为11.9min。
[0034]本发明采用以CHIRALPAK AD-H为手性色谱柱，以低级烷烃与低级醇的混合溶液为流动相，可以将安塞曲匹及其异构体进行有效分离，分离度达到1.5以上或2.5以上，完全基线分离，出峰位置稳定，从而可以准确有效控制安塞曲匹及其异构体的质量。采用本发明所述的分离方法，分离检测安塞曲匹及其异构体的时间在80分钟以内，在一些实施例中为50分钟以内，在一些实施例中为30分钟以内，本发明的方法能简单、快速、准确的分离检测出安塞曲匹及其异构体。

【专利附图】

【附图说明】
[0035]图1示空白溶液的高效液相色谱图。
[0036]图2示实施例2安塞曲匹光学异构体系统适用性对照品的高效液相色谱图。
[0037]图3示实施例3安塞曲匹供试品的高效液相色谱图。
[0038]图4示实施例4安塞曲匹供试品的高效液相色谱图。

【具体实施方式】
[0039]为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0040]本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。
[0041]本发明中，mg表不晕克，ml表不晕升，μ L表不微升。
[0042]实施例1
[0043]仪器与条件
[0044]美国Agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；
[0045]以CHIRALPAK AD-H(4.6x 250mm)为分离柱；紫外检测波长:250nm ；
[0046]流动相:正己烧:异丙醇=95:5 ;
[0047]柱温30°C;
[0048]进样体积为15yL;
[0049]流速0.6ml/min ；
[0050]实验步骤
[0051 ] 稀释剂/空白溶剂:正庚烷；
[0052]取安塞曲匹光学异构体系统适用性对照品约25mg，精密称定至25mL容量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0053]分别取空白溶液和系统适用性溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。
[0054]—、系统适用性对照品:
[0055]成分:安塞曲匹、对映异构体、非对映异构体1、非对映异构体2 ；
[0056]制备过程描述:往成品API分别添加一定量的对映异构体、非对映异构体1、非对映异构体2。
[0057]二、对映异构体、非对映异构体1、非对映异构体2的定性检测采取下述方法:
[0058]A空间构型的确定:分别配制一定浓度的对映异构体、非对映异构体1、非对映异构体2溶液，通过核磁共振分析方法对上述样品进行空间构型的确定。
[0059]B正相分析方法的定位:在核磁共振图谱上确定空间构型的基础上，分别配制一定浓度的对映异构体、非对映异构体1、非对映异构体2溶液，用正相色谱分析方法分别进行定位，确定各异构体杂质的出峰位置。最终确定，安塞曲匹出峰位置保留时间(RT)约为10.24min，其对映异构体RT约为8.39min，其非对映异构体的RT约为8.98min和约为11.95min。
[0060]实施例2
[0061]取安塞曲匹供试品约25mg，精密称定至25mL容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0062]取供试品溶液，按照实例I的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。
[0063]实施例3
[0064]取不同批次光学异构体含量不同的安塞曲匹供试品约25mg,精密称定至25mL容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0065]取供试品溶液，照实例I的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图4。
[0066]本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。
【权利要求】
1.一种分离检测安塞曲匹及其异构体的方法，其特征在于，用填料为涂覆直链淀粉类或键合纤维素类的手性色谱柱为分离色谱柱，以低级烷烃和/或醇类溶剂为流动相。
2.如权利要求1所述的方法，所述的手性色谱柱为CHIRALPAKAD-H。
3.如权利要求1所述的方法，所述的低级烷烃为正己烷、环己烷、正戊烷、正庚烷的一种或几种。
4.如权利要求1所述的方法，所述的醇类溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇的一种或几种。
5.如权利要求1所述的方法，所述低级烷烃与醇类溶剂的体积比为100:0至80:20。
6.如权利要求1所述的方法，所述低级烷烃与醇类溶剂的体积比为95:5。
7.如权利要求1所述的方法，所述的流动相为正己烷和异丙醇，其体积比为95:5。
8.如权利要求1所述的方法，安塞曲匹及其异构体的分离检测包括以下步骤: a)取一定量的安塞曲匹及其异构体混合物，用正庚烷作为稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液； b)取供试品溶液，按如下的条件进行高效液相色谱分析: 色谱柱为 CHIRALPAK AD-H, 检测器为DAD检测器，检测波长230nm-270nm，
流速为 0.3-1.lml/min, 柱温为20-40°C， 进样量为2-30 μ L 运行时间为80分钟以内， 供试液配制:用稀释剂将供试品配制成0.3-5mg/ml,优选lmg/ml的溶液； c)记录色谱图。
9.如权利要求8所述的方法，安塞曲匹及其异构体的分离检测包括以下步骤: a)取一定量的安塞曲匹及其异构体混合物，用正庚烷作为稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液； b)取供试品溶液，按如下的条件进行高效液相色谱分析: 以CHIRALPAK AD-H (4.6x 250mm)为分离柱；紫外检测波长为250nm ； 流动相为正己烷:异丙醇=95:5 ； 柱温30°C ； 进样体积为15μ L ;
流速 0.6ml/min ； c)记录色谱图。
【文档编号】G01N30/02GK104181252SQ201410441412
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】刘瑞娟, 文景兵, 饶万兵, 刘国柱, 卢凌春, 姚力华 申请人:广东东阳光药业有限公司